[发明专利]用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及免疫技术检测领域，具体涉及用于检测水痘‑带状疱疹病毒感染的试剂及其制备方法。所述试剂包括R1试剂和R2试剂；R1试剂为链霉亲和素磁珠工作液，其制备方法包括：将活化的羧基磁珠与链霉亲和素进行第一次偶联；对第一次偶联得到的磁珠进行透析，除去与磁珠物理式结合的链霉亲和素；将透析后的磁珠与链霉亲和素进行第二次偶联；对第二次偶联得到的磁珠进行淬灭，然后将其置于工作液中，即得；所述工作液含有胎牛血清、牛血清白蛋白和赖氨酸；R2试剂为生物素化VZV gE重组蛋白，所述VZV gE重组蛋白是由人胚肾细胞表达的水痘‑带状疱疹病毒gE糖蛋白胞外域片段。本发明的试剂对水痘‑带状疱疹病毒感染的检测具有很高的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及免疫技术检测领域，具体涉及一种用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂及其制备方法。

背景技术

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus，VZV)、单纯疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)及非洲淋巴细胞瘤病毒(Epstein-Barr病毒，EBV)均属疱疹病毒属，都是对人类有致病性的疱疹病毒。VZV是一种双链DNA病毒，为α疱疹病毒亚科，以人类为其唯一自然宿主且具有嗜神经性。VZV的主要传播方式是液滴传播(污染的气溶胶)或污染物传播(如含病毒的小囊泡或焦痂)，是临床水痘和带状疱疹共同的病原体。VZV基因组有71个基因，编码67个不同蛋白，包括6种糖蛋白(gpI～gpVI)，现统一分别命名为gE、gB、gH、gI、gC和gL。在受感染的细胞中，糖蛋白gE、gB和gH极为丰富，在病毒体的胞膜中也存在这些糖蛋白。其中gE蛋白由623个氨基酸组成，其由ORF68基因编码，该基因由1872个碱基组成，位于VZV基因组的短片段区。其N端为544个氨基酸的亲水胞外区(含有信号肽)，C端是17个氨基酸的跨膜疏水区和62个氨基酸的胞内区。gE属于I型膜蛋白，是生成感染性VZV颗粒的必需糖蛋白，也是病毒包膜和感染细胞膜上免疫原性最强、含量最丰富的糖蛋白。

VZV感染人有两种类型，即原发感染水痘(varicella)和复发感染带状疱疹(zoster)。当患者初次感染VZV时会发生水痘症状，病愈后病毒会终身潜伏于感觉神经节的神经细胞中，数年后，宿主高龄或机体免疫力下降时，潜伏的病毒可能再次激活并大量增殖，对皮肤细胞和局部神经产生损伤，形成带状疱疹。水痘如不及时诊断治疗，将继发水痘性肺炎、脑炎、心肌炎等，甚至造成死亡，而带状疱疹会带给患者长时间的剧烈疼痛，给患者生活带来许多不便，给公共卫生支出带来负担。近年来水痘、带状疱疹发病率出现上升趋势，全球陆续有重症水痘致死的病例报道，而且在人员聚集区域容易造成爆发性流行。

VZV是感染的常见病毒之一，血液检测有助于病毒的早期诊断。目前临床上主要依靠典型的临床症状和皮损来进行VZV感染诊断，但其他病毒(如柯萨奇病毒、单纯疱疹病毒)感染同样也会引起水痘样皮疹。因此，VZV感染后仅通过典型的临床症状和皮损判断容易漏诊和误诊，需依靠实验室检查进行辅助诊断，确诊依赖于疱疹液接种分离病毒，或血清特异性IgM型抗体阳性。疱疹液接种分离病毒方法操作过于复杂费时，故临床上最常用的方法为血清特异性IgM型抗体检测方法。

磁颗粒化学发光免疫分析是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法。该技术充分利用了磁性分离技术的快速且易自动化性，化学发光技术的高灵敏性，以及免疫分析的特异性，在生物分析领域展现了极高的性能。磁颗粒化学发光法是免疫类试剂中的最尖端技术，但其技术壁垒高，其最核心技术为磁珠与抗原的偶联。

链霉亲和素是由链霉菌分泌的一种蛋白质，它能与生物素发生特异性结合，它们之间的结合力是目前已知的最强的非共价键结合力。因为这一特性，链霉亲和素-生物素反应体系在纯化和检测领域得到了广泛的应用。链霉亲和素以同源四聚体的形式存在，每摩尔的四聚体分子可结合四摩尔的生物素分子，所以在免疫检测领域具有信号放大作用，可进一步提高免疫反应的灵敏度，但链霉亲和素与磁珠偶联常存在物理吸附导致连接效率低等情况，从而影响磁珠使用的最终灵敏度。