[发明专利]用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂及其制备方法在审
| 申请号： | 202310197237.2 | 申请日： | 2023-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN116539875A | 公开（公告）日： | 2023-08-04 |
| 发明（设计）人： | 吴凡;侯仰龙;李润涛;孙益祺 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/532;C07K14/04;C12N15/85;C12N15/38 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 刘丹 |
| 地址： | 100080*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 水痘 带状疱疹 病毒感染 试剂 及其 制备 方法 | ||
1.用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；
所述R1试剂为链霉亲和素磁珠工作液，其制备方法包括：将活化的羧基磁珠与链霉亲和素进行第一次偶联；对第一次偶联得到的磁珠进行透析，除去与磁珠物理式结合的链霉亲和素；将透析后的磁珠与链霉亲和素进行第二次偶联；对第二次偶联得到的磁珠进行淬灭，然后将其置于工作液中，即得；所述工作液含有胎牛血清、牛血清白蛋白和赖氨酸；
所述R2试剂为生物素化VZV gE重组蛋白，所述VZV gE重组蛋白是由人胚肾细胞表达的水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白胞外域片段。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，使用pH 7.2-7.6的0.01-0.03M磷酸盐缓冲液作为透析液对第一次偶联得到的磁珠进行透析；和/或使用淬灭缓冲液对第二次偶联得到的磁珠进行淬灭，所述淬灭缓冲液由2-羟基乙胺和pH 7.2-7.6的0.01-0.03M磷酸盐缓冲液组成。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述人胚肾细胞为HEK293F细胞；和/或所述水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白胞外域片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述工作液为含有0.2％-0.4％(v/v)胎牛血清、4-6g/ml牛血清白蛋白和0.1-0.3g/ml赖氨酸的pH 7.2-7.6的18-22mM磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，还包括R3试剂；所述R3试剂为吖啶酯标记的抗人IgM抗体。
6.制备权利要求1～5任一所述的用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂的方法，其特征在于，包括：
S1：将活化的羧基磁珠与链霉亲和素进行第一次偶联；对第一次偶联得到的磁珠进行透析，除去与磁珠物理式结合的链霉亲和素；将透析后的磁珠与链霉亲和素进行第二次偶联；对第二次偶联得到的磁珠进行淬灭，然后将其置于工作液中，得到链霉亲和素磁珠工作液；所述工作液含有胎牛血清、牛血清白蛋白和赖氨酸；
S2：利用人胚肾细胞表达水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白胞外域片段，并用生物素标记所述片段，得到生物素化VZV gE重组蛋白。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，使用pH 7.2-7.6的0.01-0.03M磷酸盐缓冲液作为透析液对第一次偶联得到的磁珠进行透析；和/或使用淬灭缓冲液对第二次偶联得到的磁珠进行淬灭，所述淬灭缓冲液由2-羟基乙胺和pH 7.2-7.6的0.01-0.03M磷酸盐缓冲液组成。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述人胚肾细胞为HEK293F细胞；和/或所述水痘-带状疱疹病毒gE糖蛋白胞外域片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述工作液为含有0.2％-0.4％(v/v)胎牛血清、4-6g/ml牛血清白蛋白和0.1-0.3g/ml赖氨酸的pH 7.2-7.6的18-22mM磷酸盐缓冲液。
10.一种试剂盒，其包含权利要求1～5任一所述的用于检测水痘-带状疱疹病毒感染的试剂。
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