[发明专利]一种小麦籽粒半薄切片的制备方法

说明书

本发明公开了一种小麦籽粒半薄切片的制备方法，包括以下步骤：(1)取样：采用冰刀片切取小麦颖果中部的样块；(2)固定：采用FAA固定液进行固定；(3)洗涤；(4)脱水：采用不同浓度的乙醇进行逐级脱水；(5)渗透：采用JB‑4包埋试剂盒中配制的JB‑4I渗透液和乙醇进行逐级渗透；(6)包埋：采用JB‑4包埋试剂盒中配制的JB‑4E包埋液进行包埋处理；(7)切片；(8)粘片；(9)染色：采用希夫试剂染色液进行染色。本发明提供了一套新的适用于小麦籽粒的半薄切片的固定包埋技术，采用FAA固定液固定小麦颖果，采用JB‑4I渗透液对小麦颖果进行渗透，采用JB‑4E包埋液对小麦颖果进行包埋，包埋时所需温度低，持续时间大幅缩短，可节约制片时间。

技术领域

本发明涉及一种半薄切片的制备方法，尤其涉及一种小麦籽粒半薄切片的制备方法。

背景技术

小麦是主要的粮食作物，提高单位面积小麦产量是农业生产的重大目标。小麦籽粒中积累的淀粉和蛋白质的数量被认为是影响小麦产量和品质的主要因素。在籽粒灌浆期，营养物质通过颖果营养转移组织传递到胚乳(Yu Xurun等，2015，Protoplasma 252:605-617)。小麦颖果腹部维管束是营养物质进入颖果的主要途径，从腹部筛管输出的养分经过韧皮薄壁细胞、木质部薄壁细胞、合点、珠心突起等部位进入胚囊(周竹青等，2003，电子显微学报，(04):292-297)。切片技术为观察小麦颖果腹沟维管束等营养转移组织形态结构、了解籽粒发育过程中营养物质的运输提供了有利条件。

目前植物组织切片技术多采用徒手切片法、石蜡切片法和半薄切片法。徒手切片法指用金属刀片将植物组织切成薄片，该方法难以控制样品的切取厚度，易造成切片厚度不均，且不易切取太小、太软和太硬的样品薄片，无法观察小麦胚乳细胞及其内容物质的形态(赵凌霄，2019，扬州大学博士学位论文)。石蜡切片法可以切出薄厚均匀的组织切片，做到连续切片；但该方法一般适用于发育早期的小麦颖果，发育中、后期或成熟期的小麦颖果内贮藏物质增多，不利于观察胚乳细胞的精细结构和淀粉粒形态(刘娟，2022，麦类作物学报，42(01):42-53；赵凌霄，2019，扬州大学博士学位论文)。半薄切片法所得到的样品切片厚度一般介于超薄切片和石蜡切片厚度之间，在光镜下对组织微细结构的观察效果优于常规石蜡切片，视野比超薄切片广(黄静等，2022，解剖学研究，44(03):269-270)；该方法可获得灌浆中后期优质的小麦籽粒组织切片(余徐润，2016，扬州大学博士学位论文)。因此，半薄切片法是观察发育中、后期小麦颖果养分运输组织发育的形态和贮藏内容物的一条非常重要的途径。

目前半薄切片法多采用戊二醛固定液对植物组织固定，包埋液在60-70℃聚合，聚合时间多为10-48h(刘大同，2017，麦类作物学报，37(06):739-749；葛鑫源，2021，南京农业大学学报，44(02):217-224)，存在着包埋温度要求高不利于观察温度敏感的样品、聚合时间长导致制片周期长的技术问题。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种包埋温度低、持续时间短和节约制片时间的小麦籽粒半薄切片的制备方法。

技术方案：本发明所述的一种小麦籽粒半薄切片的制备方法包括以下步骤：

(1)取样：采用冰刀片切取小麦颖果中部的样块；

(2)固定：采用FAA固定液进行固定，FAA固定液的组成为：70％乙醇：冰醋酸：福尔马林的体积比＝18:1:1；

(3)洗涤；

(4)脱水：采用不同浓度的乙醇进行逐级脱水；

(5)渗透：采用JB-4I渗透液和无水乙醇进行逐级渗透；

(6)包埋：采用JB-4E包埋液进行包埋处理；

(7)切片；

(8)粘片；

(9)染色：采用希夫试剂染色液进行染色。