[发明专利]与胃癌化疗5-FU敏感性相关的多基因联合突变检测的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及与胃癌化疗5‑FU敏感性相关的多基因联合突变检测的试剂盒及其应用，属于生物医药技术领域，本发明提供了一种基于半导体测序技术检测胃癌多基因联合检测的试剂盒，以半导体测序法对人血液中样本中DFHR、MTR、MTHFR、GGH、SLC19A1、CDA、XPC、UMPS、FCGR3A、CYP2B6‑1、ABCC2、DYNC2H1、CBR3、ABCC4等14余种基因的16个突变位点检测，提供基因的突变状态，本发明提供的多重PCR联合高通量测序技术的检测方法可以直接反应相关基因的具体突变位点，可以直接用于指导临床胃癌化疗敏感用药癌症愈后监测。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及与胃癌化疗5-FU敏感性相关的多基因联合突变检测的试剂盒及其应用。

背景技术

胃癌是全球发病率排名第三的常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率与病死率均保持逐年上升的趋势。而对于晚期胃癌患者多数已错过最佳治疗时期，尽管目前已有手术、放化疗、生物靶向治疗等多种治疗方法，但其5年生存率仍不到30％。化疗是当前胃癌治疗过程中重要的辅助治疗措施。其中5-FU是胃癌化疗的基本用药，但患者因个体遗传学或表观遗传学差异导致对5-FU个体敏感性迥异从而影响5-FU总体疗效。因此，了解胃癌患者对5-FU化疗药物敏感性的相关因素，对于胃癌患者进行精准治疗尤为重要。

叶酸代谢基因是调控肿瘤对氟尿嘧啶反应的重要因素，所以对于这些基因多态性的分析，有助于预测患者对于五氟尿嘧啶的反应。二氢叶酸还原酶(DHFR)在叶酸代谢途径中也起着重要作用。它催化氧化叶酸(如叶酸和二氢叶酸)还原为四氢叶酸。因此，补充叶酸的益处取决于DHFR活性。蛋氨酸合酶(MTR)是负责5-甲基四氢叶酸甲基不可逆转移的酶，从而产生蛋氨酸，s-腺苷甲硫氨酸(SAM)的前体，通用甲基供体。MTHFR是参与叶酸代谢途径的一种必需酶。它将5,10-亚甲基四氢叶酸还原为5-甲基四氢叶酸，这是同型半胱氨酸/蛋氨酸转化的甲基供体。5,10-亚甲基四氢叶酸是氟尿嘧啶抑制胸苷酸合成酶(TS)的必要辅助因子，其可用性的增加可能导致体内氟尿嘧啶活性的变化.γ-谷氨酰水解酶(GGH)是一种溶酶体酶，参与叶酸和抗叶酸的代谢。它作为一种内切和/或外切肽酶，在进入哺乳动物细胞后切割附着在叶酸和抗叶酸上的γ-聚谷氨酸链。SLC19A1是叶酸营养素和抗叶酸疗法的主要转运蛋白，故而可以将SLC19A1作为多种生理和病理过程中的关键因子，也认可用来判断肿瘤对于氟尿嘧啶的反应。

氟尿嘧啶很大一部分作用来自其对DNA的损伤，而一些DNA损伤修复基因对于氟尿嘧啶的作用影响必定起着举足轻重的作用。X射线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)在细胞中发挥着修复单链断裂和碱基切除的作用，DNA损伤识别与修复因子(XPC)编码的蛋白质对损伤感知和DNA结合很重要，并表现出对单链DNA的偏好，在全球基因组核苷酸切除修复(NER)的早期步骤中起着重要作用，ERCC1是核苷酸切除修复(NER)途径的关键调节因子,在核苷酸切除修复途径中起作用，并用于修复DNA损伤。

ABCC2、ABCC4同属于ATP结合盒(ABC)亚家族，ABC蛋白通过细胞膜外和细胞膜内运输各种分子,包括各类抗癌药物；CYP2B6编码细胞色素P450超酶家族的一员,它催化许多涉及药物代谢和胆固醇、类固醇和其他脂类合成的反应，这类药物运输、代谢调控因子在必然也是氟尿嘧啶发挥作用的重要一环。

众所周知，氟尿嘧啶最为重要的作用在于其对于细胞嘧啶合成的干扰，对于细胞嘧啶池调控的基因一定对氟尿嘧啶的作用敏感性有着重要的调控作用，CDA编码了一种参与打捞嘧啶的酶,它是负责维持细胞嘧啶池的几种脱氨酶之一；UMPS编码一种双功能酶，催化从头嘧啶生物合成途径的最后两个步骤。

有研究表明许多化疗药物通过产生反应性物质而具有细胞毒性，与氧化应激相关的基因变异可能会影响肿瘤患者化疗效果和预后，CBR3作为氧化还原应激相关的基因，其对氟尿嘧啶的作用效果影响也是值得探究的一环。