[发明专利]用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法

权利要求书

1.用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、切掉经过OCT包埋剂包埋的冰冻组织表面的OCT包埋剂，切片，剥离切片周围多余的OCT包埋剂；

S2、在所述切片中加入裂解液，进行研磨、裂解；

S3、加入洗涤液混匀，过细胞筛，离心弃上清；再加入洗涤液重悬、沉淀；

S4、吸取上层液体过枪头筛若干次，加入核悬液后离心弃上清，再加入核悬液重悬，完成细胞核提取。

2.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S1的具体方法为：将OCT包埋剂包埋冰冻组织固定在切片机上，切掉组织表面的OCT包埋剂，直至暴露出组织的最大切面后，收集若干片切片，剥离切片周围的多余OCT包埋剂。

3.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S2中，所述裂解液的原料和终浓度分别为：基础缓冲液1mL、NP400.2wt％、BSA 0.01wt％、RNaseinhibitor 1U/μL和无核酸无酶水。

4.根据权利要求3所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，所述基础缓冲液的原料和终浓度分别为：NaCl 292mM、Tris-HCl 20mM、CaCl₂ 2mM、MgCl₂ 42mM和无核酸无酶水。

5.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，所述S3中，所述洗涤液的原料和终浓度分别为：Tris-HCl 10mM、NaCl 10mM、MgCl₂ 3mM、BSA 1wt％、Tween-20 0.1％、DTT 1mM、RNase inhibitor 1U/μL和无核酸无酶水。

6.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S4中的核悬液的原料和终浓度分别为：BSA 1wt％、RNase inhibitor 1U/μL和PBS缓冲液。

7.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S4中，过枪头筛的具体方法是：用移液器吸取步骤S3处理后的上层液体1ml，将移液器头插在枪头筛中约0.5cm的深度，在枪头筛下方放置离心管，将所述上层液体打入离心管中；重复操作一次。

8.根据权利要求7所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S4中，所述枪头筛为过滤孔径40μm的枪头筛。