[发明专利]一种羊源性基因组DNA的提取方法、试剂盒和应用

权利要求书

1.一种羊源性基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）用手术刀切取动物组织，再将组织剁成匀浆状，之后将组织匀浆转移到离心管中；

（2）加入含有蛋白酶K的50-60℃预热的裂解液，旋涡振荡使组织匀浆分散开，使组织与裂解液充分接触；之后将离心管转移至50-60℃水浴锅中直至组织匀浆全部溶解，水浴期间每隔一段时间都需重新旋涡振荡，防止组织匀浆沉底，帮助组织溶解；

（3）加入抽提液，盖紧管盖，振荡使其混匀；≥12000g离心5分钟；

（4）吸取步骤（3）中的上清液，转移到一个新的离心管中；

（5）重复抽提步骤（3）和（4）一至两次；

（6）吸取步骤（5）中的上清液，加入6ml异丙醇，盖紧管盖，使上清液和异戊醇混匀；

（7）吸取步骤（6）中15ml混合液加入核酸纯化柱中，盖上管盖，≥12000g离心1分钟；

（8）弃离心管中的滤液，将所述核酸纯化柱置回到离心管中，在所述核酸纯化柱中加入10ml洗脱液，盖上管盖，≥12000g离心1分钟；

（9）弃离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到离心管中，在核酸纯化柱中加入15ml乙醇，盖上管盖，≥12000g离心1分钟；

（10）重复步骤（10）一次；

（11）弃离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到离心管中，≥12000g离心5分钟；

（12）弃离心管，将核酸纯化柱置于一个新的离心管中，在核酸纯化柱中加入1-3ml 50-60℃温育的TE，盖上管盖，50-60℃恒温培养箱中静置5分钟，≥12000g离心1分钟；

（13）弃核酸纯化柱，洗脱的DNA可立即用于后续实验；或将DNA储存于-20℃备用；

（14）测DNA浓度和纯度；

其中，所述裂解液中含有Chelex-100。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液由以下组成成分构成：NaCl、Tris-HCl、EDTA, pH 8.0、SDS、Proteinase K、Chelex-100和无菌水。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述裂解液中各组成成分的终浓度如下：NaCl 100mM；Tris-HCl 10mM；EDTA, pH 8.0 25mM；SDS 0.5%；Proteinase K 0.1 mg/ml和Chelex-100 5%。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抽提液包含以下组成成分：苯酚、氯仿和异戊醇。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抽提液中苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24:：1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液的加入量为每1g动物组织加入7.5ml。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抽提液的加入量为每1g动物组织加入7.5ml。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱液为75%乙醇。

9.一种羊源性基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用权利要求1-7任意一项权利要求所述的方法。

10.权利要求1-7任意一项权利要求所述的方法和权利要求8所述的试剂盒在羊源性基因组DNA提取中的应用。