[发明专利]柑橘黄龙病菌SDE3蛋白抗体在检测柑橘黄龙病中的应用

说明书

本发明公开了柑橘黄龙病菌SDE3蛋白抗体在检测柑橘黄龙病中的应用，属于分子生物学技术领域。所述SDE3蛋白抗原为A1)或A2)的蛋白质：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；A2)在A1)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合标签蛋白得到的具有与A1)相同活性的可溶性融合蛋白。本发明提供的抗体可以简单准确检测出植株是否感染黄龙病菌，可为植株黄龙病菌的检测提供极大的支持。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及柑橘黄龙病菌SDE3蛋白抗体在检测柑橘黄龙病中的应用。

背景技术

柑橘黄龙病(Huanglongbing，HLB)是一种危害世界柑橘产业的毁灭性的虫媒细菌性病害。黄龙病菌是一种韧皮部限制、难培养的革兰氏阴性α-变形杆菌，根据其发现的地理分类，可分为三个亚种，分别是亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus(Las)、美洲种Candidatus Liberibacter americanus(Lam)和非洲种Candidatus Liberibacterafricanus(Laf)，Las和Lam由亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri)进行传播，而Laf是由非洲柑橘木虱(Trioza erytreae)传播，其中Las分布最为广泛，最早在亚洲报道，但已传播到非洲、中东以及整个美洲，并且由其引起的症状更严重。

先前的研究表明Las缺乏典型的III型(T3SS)分泌系统，但包含完整的Sec分泌系统(Secretory pathway)。Sec分泌系统是一种细菌内保守的途径，参与细菌蛋白的跨膜转运过程，对其生存十分重要。伴侣蛋白SecB识别具有N末端信号肽的分泌前蛋白，将其引导到内膜与SecA结合，SecA将蛋白质引导至SecYEG通道并为蛋白质易位提供能量，前蛋白通过SecYEG通道穿过内膜，信号肽被切割，转移到周质。然后通过外膜中的B桶蛋白、自转运或外膜囊泡的方式穿过外膜分泌到细胞外。目前，对黄龙病菌外泌蛋白的功能研究已经取得一些进展。

目前，HLB尚无有效的抗病基因和治疗药剂，还是通过三板斧：灭虫、无菌苗木组培脱毒、一旦发现病树及时砍除的方法来防控。早期感染的树木症状难以识别，若未能及时砍除都会成为柑橘木虱进一步传播的传染源，一片柑橘园内只要有一棵树发病，携带黄龙病菌的柑橘木虱的迁移就能够在几年内将整个果园摧毁殆尽。因此，无论是对无菌苗木的早期检测还是对病树的早期诊断，柑橘产业都急需快速可靠且灵敏性高的病原早期检测技术，以实现对柑橘黄龙病的早发现，早管理的目标，阻断黄龙病的蔓延。

目前，黄龙病病菌的检测方法主要包括田间检测、电镜检测、光谱成像检测、PCR检测和血清学方法检测等手段。由于柑橘感染黄龙病初期叶片并没有明显症状，其潜伏期从几个月到一年甚至更长时间；而且即使显症，其症状极易与其他疾病或营养缺乏引起的症状混淆，在感染初期也很难发现，因此依据症状的田间检测方法在黄龙病早期检测中具有很大的局限性。电镜检测法由于受样品采集和处理等客观因素影响，其检出率较低，一般在60％～70％，存在大量的漏检。光谱成像检测法不仅需要价格昂贵的仪器设备，还需要专业的技术人员。PCR检测因其可批量进行，能同时完成定性及定量分析已成为实验室检测黄龙病菌的常用方法，但由于菌体在植株内的分布不均，需要采集大量样本以排除假阴性，比较费时费力。近年来，血清学方法也被应用于黄龙病的检测，如柑橘黄龙病菌Serralysin蛋白多克隆抗体制备和柑橘黄龙病菌外膜蛋白多克隆抗体制备，但是其制备的抗体主要应用于HLB感染后期的样品检测，在病原早期感染的检测应用中鲜有报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够在病原早期检测出样品是否感染黄龙病的方法。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

本发明提供了一种抗体在检测植物黄龙病中的应用或在制备检测植株黄龙病的试剂盒中的应用，所述抗体为SDE3蛋白抗原的特异性抗体，所述SDE3蛋白抗原为A1)或A2)的蛋白质：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质；