[发明专利]基于时珍法鉴定鹿科动物的物种特异性靶标序列、试剂盒及应用

说明书

本申请公开了基于时珍法的用于鹿科动物鉴定的物种特异性靶标序列、引物对、试剂盒、它们的应用及物种鉴定方法，其中，基于通过时珍法筛选得到的鹿科动物的物种特异性靶标序列，实现了对待检测样品的物种鉴定。本发明的物种鉴定方法特异性强，灵敏度高，重复性好，可实现物种的快速鉴定，具有广阔的应用前景。

技术领域

本申请涉及鹿科动物鉴定技术领域，具体涉及一种基于时珍法(Analysis ofwhole-GEnome，AGE，又称全基因组分析法或阿哥法)鉴定鹿科动物的物种特异性靶标序列、引物对、试剂盒、它们的应用及物种鉴定方法。

背景技术

地球上生活着874万个真核生物物种，其中四分之三以上属于动物界。在食物、医药和工业等领域，丰富的动物资源对人类的生存都至关重要。动物的生理学和生活方式为人类提供了无数的灵感来源。然而，在“第六次灭绝浪潮”中，动物的生物多样性损失严重。鹿科动物是世界上最丰富的大型哺乳动物之一，鹿科(Cervidae)包括4个亚科，分别是鹿亚科(Cervinae)、獐亚科(Hydropotinae)、麂亚科(Mun tiacinae)和空齿鹿亚科(Odocoileinae)，共16属约52种，在极北地区、热带地区和高海拔地区都有分布。鹿科动物较其他科属动物最大的特点是其进化出周期性再生新器官——鹿茸角。鹿科动物作为哺乳动物器官再生的研究模型，具有重要科学价值。《本草纲目》记载称鹿茸可入药，具有温肾壮阳、益精补血、强筋健骨等功效。2020版的《中国药典》明确指出梅花鹿和马鹿鹿茸品种的产品为正宗中药材原料。

准确的动物物种鉴定是动物资源保护和动物生物多样性的基础。为了区分鹿科动物物种，人们开发了多种检测技术。形态学检测方法是最传统且基础的鉴别方法。但该方法对样品鉴别时需要完整的组织结构，不能遭到破坏，故在市场检测中有很大的局限性。随着分子技术的进步，荧光定量PCR、限制性片段长度多态性技术、测序技术和DNA条形码技术等发展起来的新方向，在目前的鉴定领域使用范围最广，但一些方法较为繁琐、或者存在脱靶风险。

时珍法是从物种全基因组出发寻找特异靶标序列，精准识别特异靶标序列，实现物种准确鉴定的分子诊断方法。基于不同物种基因组序列间的差异，时珍法在生物信息学分析和实验操作两个层面找到目标物种的特异靶标序列，并通过识别特异靶标序列进行鉴定。与传统DNA条形码相比，全基因组序列具有更丰富的物种生物信息，因此有望基于时珍法从鹿科动物全基因组、即核基因组和线粒体基因组开发有效鉴别鹿科动物的特异靶标序列，以期用于鹿科动物、鹿科动物组织或器官(例如鹿科动物不同部位的肉)或者含有鹿科动物的药材、饮片及相关中成药的基原鉴定。

发明内容

本发明基于时珍法筛选鹿科动物全基因组(即核基因组和线粒体基因组)，开发出了能够有效鉴别鹿科动物的特异靶标序列和特异引物对等，从而使得在鉴定鹿科动物及与其相关的样品时，鉴定过程便捷快速，鉴定结果准确，灵敏度高。

在一个方面，本发明提供了选自如下的鹿科动物的物种特异性靶标核苷酸：(1)以SEQ ID NO：7(TTTCCTTCTTATGAATCCGAGCATCT)示出的靶标核苷酸；(2)以SEQ ID NO：8(GCACACATGTACAATGGTACATAAA)示出的靶标核苷酸；或(3)以SEQ ID NO：9(TTTCTACTTCTTCTAGCATCATCCA)示出的靶标核苷酸。

另一方面，本发明提供上述的靶标核苷酸在对鹿科动物或源自鹿科动物的材料进行物种鉴定、或者区分鹿科动物与其近缘物种中的应用。

本发明首次发现了在鹿科动物中存在上文示出的物种特异性的靶标核苷酸序列。其中，以SEQ ID NO：7示出的靶标核苷酸见于马鹿，以SEQ ID NO：8示出的靶标核苷酸见于梅花鹿；并且以SEQ ID NO：9示出的靶标核苷酸见于驯鹿。

在一些实施方式中，所述鹿科动物可选自马鹿、梅花鹿和驯鹿，但不限于此。

另一方面，本发明提供了一种用于对鹿科动物或源自鹿科动物的材料进行物种鉴定的引物对，包括：