[发明专利]检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物及试剂盒

权利要求书

1.一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物，其特征在于：包括20对特异性引物，具体如表1所示，如SEQ ID NO.1～40所示；

表1

2.权利要求1所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物在制备检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒中的应用。

3.一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物，以及PCR反应所必须的试剂。

4.根据权利要求3所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒，其特征在于，是由以下组分组成的：polymerase mixture，10μL；Enhancer buffer，6μL；混合引物，5μL；基因组DNA，50ng；余量为去离子水；共30μL。

5.根据权利要求4所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒，其特征在于，所述混合引物中，20对引物对的摩尔比为T1P1：T1P2：T1P3：T1P4：T1P5：T1P6：T1P7：T1P8：T1P9：T1P10：T1P11：T1P12：T1P13：T1P14：T1P15：T1P16：T1P17：T1P18：T1P19：T1P20＝1.5：1.4：1.3：1.0：1.5：1.4：1.1：1：1：1：1.7：1.7：1.3：1：1：3：1：1.4：1：1.1。

6.权利要求1所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物或权利要求2～5中任一项所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒在解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因检测中的应用。

7.一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待检测样品，进行基因组DNA提取；

(2)利用权利要求1所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物或权利要求2～5中任一项所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的试剂盒进行PCR扩增；

(3)对PCR产物进行纯化，制备文库；然后进行二代测序。

8.根据权利要求7所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的检测方法，其特征在于：所述待检测样品为患者的干血斑、外周血或口腔拭子。

9.根据权利要求7所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：

预变性：95℃，3分钟30秒；

18个扩增循环：变性：98℃，20秒；退火+延伸：60℃，4min；

延伸：72℃，5分钟。

10.根据权利要求7所述的检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的检测方法，其特征在于：对PCR产物进行纯化，制备文库的具体操作如下：

1)向30μL PCR产物中加入27μL室温平衡后的磁珠，用移液器轻缓吸打混匀；

2)室温孵育5min，将PCR管置于磁力架上3min；

3)移除上清，加入50μL buffer B，用移液器轻缓吸打20次混匀；

4)室温孵育5min后，将PCR管置于磁力架上3min；

5)移除上清，加入180μL 80％乙醇溶液，静置30s；

6)移除上清，加入180μL 80％乙醇溶液，静置30s，彻底移除上清；

7)加24μL水，放置磁力架5min；

8)收集洗脱下来的液体于新的离心管中，检测浓度；

9)用5’端连接有通用序列的接头序列和5’端连接有通用序列的标签接头，3’端连接有通用序列的接头序列和3’端连接有通用序列的标签接头，进行一步PCR扩增，获得扩增子文库，将扩增子文库混合纯化后，用于NGS测序。