[发明专利]一种生产莫匹罗星的发酵培养基及莫匹罗星的生产方法在审
| 申请号: | 202211744274.2 | 申请日: | 2022-11-01 |
| 公开(公告)号: | CN115820763A | 公开(公告)日: | 2023-03-21 |
| 发明(设计)人: | 徐浩;徐美冬;高立;陈志立;毛亮亮;杨小虎;孙鹏;杨志清 | 申请(专利权)人: | 浙江海正药业股份有限公司 |
| 主分类号: | C12P17/16 | 分类号: | C12P17/16;C12N1/20;C12R1/39 |
| 代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
| 地址: | 318000 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 生产 莫匹罗星 发酵 培养基 方法 | ||
1.一种生产莫匹罗星的发酵培养基,其特征在于包括:葡萄糖80-120g/L、黄豆饼粉20-60g/L、棉籽饼粉10-30g/L、硫酸铵1-3g/L。
2.根据权利要求1所述的发酵培养基,其特征在于包括:葡萄糖100g/L、黄豆饼粉40g/L、棉籽饼粉20g/L、硫酸铵1g/L,所述发酵培养基的pH值为7.5±0.1。
3.一种莫匹罗星的生产方法,其特征在于包括以保藏编号为CGMCC No.25307的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)HS-PF20-62为生产菌种,采用权利要求1-2任一项所述发酵培养基进行发酵培养。
4.根据权利要求3所述的生产方法,其特征在于,所述发酵培养的温度为21℃-23℃。
5.根据权利要求3所述的生产方法,在所述发酵培养第48-96小时进行分批补料,其特征在于所述补料的物质为葡萄糖溶液;优选地,在所述发酵培养第48小时和第96小时分批补加葡萄糖溶液,每次补加葡萄糖溶液的体积为原发酵培养基体积的4%,所述葡萄糖溶液的质量百分比浓度为50%。
6.根据权利要求3-5任一项所述的生产方法,其特征在于包括:
步骤(1)菌种活化:将低温保藏的保藏编号为CGMCC No.25307的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)HS-PF20-62接种到平板培养基上,在26±1℃条件下培养24±4小时,得到涂布单菌落;
步骤(2)菌落培养:将步骤(1)得到的单菌落通过点种转移到新的平板培养基上,每个平板上点种10-12颗单菌落;在26±1℃条件下培养3-6天,得到点种单菌落;
所述平板培养基组成如下:酵母抽提物5g/L、胰蛋白胨10g/L、氯化钠10g/L,琼脂15g/L,所述平板培养基的pH值为7.5±0.1;
步骤(3)摇瓶种子液制备:挑取1颗步骤(2)培养好的点种单菌落接种到种子培养基中,将种子摇瓶置于26±1℃,摇瓶转速250±10r/min条件下培养28±4小时:
所述摇瓶种子培养基组成如下:葡萄糖20g/L、黄豆饼粉20g/L、酵母粉10g/L,碳酸钙2g/L,所述种子培养基的pH值为7.5±0.1;
摇瓶种子培养基装量:20ml/250ml;
步骤(4)摇瓶发酵培养:将步骤(3)制备的种子液按照体积比5%的移种量移入发酵摇瓶中,所述摇瓶发酵培养的发酵培养基体积装量为20ml/250ml,摇瓶发酵培养温度为22±1℃,发酵摇瓶转速250±10r/min,发酵培养周期5-7天;
所述摇瓶发酵的发酵培养基为权利要求1-2任一项所述的发酵培养基。
7.根据权利要求6所述的生产方法,其中在步骤(4)摇瓶发酵培养中,在所述发酵培养第48-96小时进行分批补料,其特征在于所述补料的物质为葡萄糖溶液;优选地,在所述发酵培养第48小时和第96小时分批补加葡萄糖溶液,每次补加葡萄糖溶液的体积为原发酵培养基体积的4%,所述葡萄糖溶液的质量百分比浓度为50%。
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