[发明专利]用于人巨细胞病毒检测的组合物、试剂盒和方法

说明书

本发明提供了一种用于人巨细胞病毒检测的组合物、试剂盒和方法，涉及分子诊断的技术领域。该组合物包含至少一组人巨细胞病毒检测引物探针组和多重DNA聚合酶，其中引物探针组包括寡聚核苷酸上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环引物和下游环引物；探针为颈环结构探针，多重DNA聚合酶包括链置换DNA聚合酶和具有5’端向3’端外切活性的DNA聚合酶。该用于人巨细胞病毒检测的组合物缓解了现有技术中存在的LAMP扩增方案特异性差，无法实现单管多重检测的技术问题。

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，尤其是涉及一种用于人巨细胞病毒检测的组合物、试剂盒和方法。

背景技术

人巨细胞病毒HCMV是人类疱疹病毒家族的第5个成员，可引起广泛的临床综合征，免疫功能正常的感染者通常无临床表现，而免疫功能低下患者感染HCMV则可能会引起严重症状，甚至危及生命。

HCMV的传播途径包括(1)母婴垂直传播：妊娠的各个时期均可发生HCMV感染，患者大多无临床症状，分为原发性感染、继发性感染、复发性感染，部分患者可出现不同的HCMV病毒株再次感染；HCMV可以通过胎盘、产道分泌物、血液、唾液及母乳等途径传播；HCMV可经泌尿生殖道排出，故新生儿可通过接触产道分泌物或者血液而发生感染。(2)水平传播：唾液是水平传播的常见媒介，HCMV可以通过人与人之间的密切接触。(3)医源性传播：HCMV可通过输血、手术、器官移植等医源性传播方式被感染。

原发性HCMV感染通常表现为无症状或临床症状不明显。单核细胞增多症是HCMV在免疫功能正常的患者中最常见的表现，其特征是发热、皮疹和白细胞增多。在典型的EBV单核细胞增多症中，主要的致病因素包括咽部分泌物和嗜异性抗体的存在，通常这些特征在HCMV单核细胞增多症中是不具有的。HCMV感染的其他表现包括贫血、肝功能异常、血小板减少、类风湿因子阳性和抗核抗体阳性。器官受累在免疫功能正常的宿主中并不常见。然而，HCMV在免疫抑制的患者，如HIV患者、实体器官移植和骨髓移植患者中是潜在的病原体。这可能与特定的器官疾病有关，例如肝炎，肺炎和结肠炎。在免疫功能低下的患者中，HCMV更具攻击性。具体疾病包括：CMV肝炎可能导致暴发性肝衰竭，CMV视网膜炎，CMV食管炎，CMV结肠炎，CMV肺炎，多发性神经根病，横贯性脊髓炎，亚急性脑炎。

目前对人巨细胞病毒的检测方法主要有直接涂片法、病毒分离培养法、血清学检测法和核酸检测法。直接涂片法虽然直观、快速与检测费用低，但该方法的阳性检出率较低，检测结果易受主观和客观因素影响，易出现假性结果。病毒分离培养法操作繁琐，要求高且时间长，无法满足大批量临床样本的处理和早期诊断的需求。而血清学方法检测的IgM只在疱疹病毒感染初期后才能被检测到，并且在病毒潜伏期和复发感染时检测常为阴性，不能反映感染的真实情况。PCR技术通过体外方式将目的基本大量扩增，并结合分子生物学手段进行检测。目前的核酸检测技术多是基于PCR技术的发展，最为常见的是荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，简称qPCR)。而随着生物技术在临床和现场检测方面的要求，替代PCR技术的核酸等温扩增技术应运而生，其中环介导等温扩增技术(Loop-mediatedIsothermal Amplification，简称LAMP)，是利用具有链置换特性的DNA聚合酶对识别的核酸序列进行催化扩增的新型技术，在恒温条件下即可完成核酸扩增，具有高敏感性优点。在疾病诊断、预后判断、预后监测等方面有着广泛的用途。但环介导等温存在特异性差、易造成气溶胶污染等问题。此外，以染料法为主的LAMP扩增方案，无法实现单管多重检测。因此，如何改进采用LAMP技术检测人巨细胞病毒，是目前需要解决的问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于人巨细胞病毒检测的组合物，缓解了现有技术中存在的LAMP扩增方案特异性差，无法实现单管多重检测的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种用于人巨细胞病毒检测的试剂盒。