[发明专利]用于人巨细胞病毒检测的组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于人巨细胞病毒检测的组合物，其特征在于，包括：至少一组人巨细胞病毒检测引物探针组和多重DNA聚合酶；

所述人巨细胞病毒检测引物探针组包括寡聚核苷酸上游外部引物、寡聚核苷酸下游外部引物、寡聚核苷酸上游内部引物、寡聚核苷酸下游内部引物、寡聚核苷酸上游环引物、寡聚核苷酸下游环引物，和寡聚核苷酸荧光探针；

所述寡聚核苷酸荧光探针为茎环结构，所述寡聚核苷酸荧光探针的5’端起始9～11个碱基和3’端起始9～11个碱基互补配对，其余碱基与检测靶点中的序列互补配对；所述寡聚核苷酸荧光探针的一端修饰有发光基团，另一端修饰有猝灭基团；

所述多重DNA聚合酶包括链置换DNA聚合酶和具有5’端向3’端外切活性的DNA聚合酶。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述寡聚核苷酸荧光探针的5’端起始10个碱基和3’端起始10个碱基互补配对；

优选地，所述寡聚核苷酸荧光探针与检测靶点互补配对的位置，位于F1c区域与B1区域之间。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述发光基团选自FAM、Alexa Fluor488、ATTO488、TET、JOE、VIC、AlexaFluor 532、ATTO532、HEX、ROX、Alexa Fluor 594、ATTO594、TAMRA、CY3、CY3.5、CY5、AlexaFluor 647、ATTO647、CY5.5、OregonGreenTM、CALRedTM、Red640、TexasRed、Alexa Fluor700或ATTO700；

优选地，所述猝灭基团选自Super Quencher 1、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl或MGB；

优选地，所述寡聚核苷酸荧光探针的5’端修饰有发光基团，3’端修饰有猝灭基团。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多重DNA聚合酶为热启动的DNA聚合酶；

优选地，所述链置换DNA聚合酶包括Bst DNA聚合酶；

优选地，所述具有5’端向3’端外切活性的DNA聚合酶包括Taq DNA聚合酶。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括缓冲物质、dNTPs、体系平衡剂、甜菜碱、盐、BSA、甘油和防止扩增产物污染的酶中的一种或多种；

优选地，所述缓冲物质包括Tris-HCl；

优选地，所述dNTPs包括dUTP；

优选地，所述体系平衡剂包括EGTA、EDTA、精氨酸、柠檬酸钠或葡萄酸钠；

优选地，所述盐包括提供镁离子和钾离子的盐；

优选地，所述盐包括硫酸铵；

优选地，所述防止扩增产物污染的酶包括UNG酶和/或UDG酶；

优选地，所述组合物还包括dATP、dCTP、dUTP、dGTP、dTTP、UNG酶、EGTA、氯化镁、氯化钾、甜菜碱、硫酸铵、BSA和甘油。