[发明专利]一种猪五体的荧光探针引物、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开一种猪五体的荧光探针引物、试剂盒及其应用，其中，猪五体包括猪立克次氏体、猪衣原体、猪肺炎支原体、弓形体、猪钩端螺旋体。本申请选择猪立克次氏体ORF5基因、猪衣原体glgp基因、猪肺炎支原体P95基因、弓形体B1基因、钩端螺旋体CLPS基因的保守序列设计探针引物，本发明试剂盒可以同时进行大批量的样本分析，一次检测即可鉴别样本中是否含有猪肺炎支原体、衣原体、立克次氏体、弓形体、钩端螺旋体，具有简便快捷、稳定性好、灵敏度高、特异性强的特点。

技术领域

本发明涉及生物学分子技术领域，尤其是涉及一种猪五体的荧光探针引物、试剂盒及其应用。

背景技术

猪养殖病害种类繁多，其中五体病感染频发，如不及时监测防治会导致大批猪群感染，造成严重的经济损失。五体是指猪立克次氏体、弓形体、衣原体、钩端螺旋体、支原体。其中前四体对母猪繁殖性能有着严重的影响，都可引起母猪的流产、早产、死胎、弱胎，新生仔猪发病，产后母猪无乳、少乳等，严重影响着母猪的繁殖性能及猪场的生产成绩。

立克次氏体病是由立克次氏体(Rickettsia)寄生于猪红细胞表面、游离于血浆及骨髓中而引起的以仔猪发热、贫血和黄疸，母猪流产等症状为特征的疾病。

衣原体(Chlamydia spp.)是一种严格细胞内寄生的、介于细菌和病毒之间的微生物。衣原体呈革兰染色阴性，有核糖体和细胞壁，含有DNA和RNA两种核酸。衣原体主要与猪的亚临床感染有关，但也可引起呼吸道疾病、腹泻、结膜炎和繁殖障碍。

猪肺炎支原体(Mhp)，是引起猪支原体肺炎(MPS)的主要病原体，该病以接触性、高度传染性、高发病率和低死亡率为特点，主要表现为咳嗽、呼吸困难，其主要危害是引起猪的生长受阻和饲料转化率严重下降，而且容易继发其他病原的感染，诱导形成慢性肺炎。

弓形虫(Toxoplasma gondii)是引起猪弓形体病的病源寄生虫，是由弓形虫侵入猪体而引起患病的一种原虫病，寄生引起的人畜共患的一种寄生虫病，以高热、呼吸及神经症状、死亡和怀孕母猪流产、畸形胎、死胎为主要特征，部分猪身体下部及耳部有淤血斑。近年来，我县多地发现“无名高热”病猪，后证实主要是由弓形体感染引起的。

猪钩端螺旋体病由钩端螺旋体感染所引起，是一种人畜共患的自然疫源性传染病，病初体温上升，采食量下降，尿液呈浓茶样或带有大量血液的红色尿液，渐进性消瘦，受孕的母猪，感染钩端螺旋体后可能会导致母猪发生流产，流出的胎儿为死胎或木乃伊胎。

五体感染在猪场是普遍的现象，特别是猪立克次氏体、支原体在猪场的感染率几乎100％，衣原体的感染率也在60％左右，弓形体、螺旋体的带菌率也比较高。因此，猪群长期处于亚健康的状态，一旦气温变化，各种应激反应，猪舍环境不良，猪自身防御功能低下时就开始活动，引发疾病。想要解决母猪五体感染，就需要定期监测五种病原的感染情况，以及环境中的病原含量，及时减少病原含量，提高猪群的免疫力与抗病能力，采取综合性的防控措施，防治结合，才能从根本上解决母猪五体感染的问题。提高母猪繁殖性能，取得良好的生产成绩。

然而，目前尚没有能够快速检测五体病的商品化检测试剂盒，因此急需研制符合当前疫情流行趋势，且能够快速高效检测鉴别上述五种病原的荧光定量PCR商品化试剂盒。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种猪五体的荧光探针引物、试剂盒及其应用，其中，猪五体包括猪立克次氏体、猪衣原体、猪肺炎支原体、弓形体、猪钩端螺旋体。本申请选择猪立克次氏体ORF5基因、猪衣原体glgp基因、猪肺炎支原体P95基因、弓形体B1基因、钩端螺旋体CLPS基因的保守序列设计探针引物，本发明试剂盒可以同时进行大批量的样本分析，一次检测即可鉴别样本中是否含有猪肺炎支原体、衣原体、立克次氏体、弓形体、钩端螺旋体，具有简便快捷、稳定性好、灵敏度高、特异性强的特点。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：