[发明专利]一种用于评价化妆品原料保湿功效的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于评价化妆品原料保湿功效的试剂盒，其特征在于，包括RNA提取试剂、RNA逆转录试剂、特异性引物和qPCR反应体系试剂，用于检测细胞维持皮肤屏障及保湿的相关因子的mRNA表达，所述相关基因包括AQP3、丝聚蛋白FLG、Caspase-14、ZO-1和CLDN1中的至少一个。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测AQP3基因表达的引物序列如SEQ ID NO：1-2所示：

正向引物：5’-CACGGTGGTTTCCTCACCAT-3’；

反向引物：5’-TCTGTGCCAGGGTGTAGATG-3’。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测FLG基因表达的引物序列如SEQID NO：3-4所示：

正向引物：5’-GGATCCTCTCACCGCGATAC-3’；

反向引物：5’-TGCCACGTGACTGTATTCCT-3’。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测Caspase-14基因表达的引物序列如SEQ ID NO：5-6所示：

正向引物：5’-CACTGCCGAGCAATTCCAG-3’；

反向引物：5’-GAAGGCACAACTGACGGGAT-3’。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测ZO-1基因表达的引物序列如SEQ ID NO：7-8所示：

正向引物：5’-TCACGCAGTTACGAGCAAGT-3’；

反向引物：5’-TTTGTTTATTTGGATGTTCGA-3’。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于检测CLDN1基因表达的引物序列如SEQ ID NO：9-10所示：

正向引物：5’-CCCTACTTTGCTGTTCCTGTCC-3’；

反向引物：5’-GATTTTCTCCTTTTGCCTCTGTGT-3’。

7.一种应用如权利要求1-6中任意一项所述试剂盒评价化妆品原料保湿功效的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)建立皮肤屏障损伤模型：使用培养基培养HaCaT细胞，分设为对照组、模型组和修复组，其中，对照组不做任何处理，模型组和修复组的细胞培养液的pH调节为7～7.5，所述修复组在加入碱液进行pH调节后，再加入一定浓度待检测的化妆品原料提取液，继续培养；

(2)使用所述试剂盒，采用qPCR法测定各组中HaCaT细胞维持皮肤屏障功能及保湿的相关因子的基因表达水平，通过基因mRNA的表达情况评价化妆品原料的保湿功效。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在HaCaT细胞培养液中加入NaOH溶液调节溶液pH＝7～7.5，破坏皮肤屏障来建立模型组。