[发明专利]检测ZFY基因的巢式PCR特异性引物、试剂盒及母猪早期妊娠诊断方法在审
| 申请号： | 202211728126.1 | 申请日： | 2022-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN115961058A | 公开（公告）日： | 2023-04-14 |
| 发明（设计）人： | 黄涛;何凡;和军飞;赵琪;李清春;祁梦凡;黎明国;符彬彬;张化鹏 | 申请（专利权）人： | 石河子大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6848;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 张晓博 |
| 地址： | 832099 新疆维*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 zfy 基因 pcr 特异性 引物 试剂盒 母猪 早期 妊娠 诊断 方法 | ||
1.一种检测ZFY基因的巢式PCR特异性引物，其特征在于，包括外侧引物和内侧引物，所述外侧引物包括上游引物ZFY-O-F和下游引物ZFY-O-R，所述内侧引物包括上游引物ZFY-I-F和下游引物ZFY-I-R，所述外侧引物和所述内侧引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1-4所示。
2.一种检测ZFY基因的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的检测ZFY基因的巢式PCR特异性引物。
3.根据权利要求2所述的检测ZFY基因的试剂盒，其特征在于，所述外侧引物和所述内侧引物的摩尔比为10：1。
4.根据权利要求2所述的检测ZFY基因的试剂盒，其特征在于，还包括Es Taq MasterMix。
5.一种检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、采集母猪外周血样，提取所述母猪外周血样本中的DNA；
S2、以步骤S1提取的所述DNA为模板，利用如权利要求1所述的外侧引物进行第一轮扩增；
S3、以所述第一轮扩增的扩增产物为模板，利用如权利要求1所述的内侧引物进行第二轮扩增；
S4、检测所述第二轮扩增的扩增产物，判断母猪是否妊娠。
6.根据权利要求5所述的检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，步骤S1中，提取所述母猪外周血样本中的所述DNA的操作包括：
将所述母猪外周血样本置于抗凝采血管中，室温3000r/min离心15min，取上层血浆用血清/血浆游离DNA提取试剂盒提取样本中的所述DNA。
7.根据权利要求5所述的检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，步骤S2中，所述第一轮扩增的PCR反应体系包括：2×Es Taq Master Mix(Dye)7.5μL、ddH2O 6.2μL、10μmol/L的上游引物ZFY-O-F和下游引物ZFY-O-R各0.4μL、模板DNA 0.5μL；
步骤S3中，所述第二轮扩增的PCR反应体系包括：2×Es Taq Master Mix(Dye)7.5μL、ddH2O 6.2μL、10μmol/L的上游引物ZFY-I-F和下游引物ZFY-I-R各0.4μL、模板DNA 0.5μL。
8.根据权利要求5所述的检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，步骤S3中，将所述第一轮扩增的扩增产物稀释10倍作为所述第二轮扩增的模板。
9.根据权利要求5所述的检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，所述第一轮扩增的扩增产物大小为358bp，所述第二轮扩增的扩增产物大小为154bp。
10.根据权利要求5所述的检测ZFY基因的母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于，步骤S4中，检测所述第二轮扩增的扩增产物的操作包括：PCR产物用0.8％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，若出现片段大小约154bp的条带，可判断母猪妊娠。
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