[发明专利]一种可双端共轭不同化合物的核酸及其合成方法和应用在审
| 申请号： | 202211658892.5 | 申请日： | 2022-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN115819474A | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 赵明;朱玉文;姚雪芳;齐金才;杨平 | 申请（专利权）人： | 苏州泓迅生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07H1/00 | 分类号： | C07H1/00;C07H21/00;C07H21/02;C07H21/04;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 陈小龙 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 可双端 共轭 不同 化合物 核酸 及其 合成 方法 应用 | ||
1.一种合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：
采用固相合成法从3’端到5’端合成核酸分子，获得3’端连接在固相载体上的核酸分子，将氨基连接到所述3’端连接在固相载体上的核酸分子的5’端，将连接氨基后核酸分子与活化酯混合进行共轭反应，将所述共轭反应的产物与氨解液混合进行氨解反应，得到所述可双端共轭不同化合物的核酸；
所述氨解液含有叔丁胺和甲醇。
2.根据权利要求1所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述固相载体包括微孔玻璃珠；
优选地，所述活化酯包括琥珀酰亚胺活化酯和/或异硫氰酸活化酯；
优选地，所述琥珀酰亚胺活化酯包括叠氮-C3-琥珀酰亚胺酯。
3.根据权利要求1或2所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述氨解液还包括水；
优选地，所述氨解液中所述叔丁胺、甲醇和水的体积比为1:1:(1～10)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述共轭反应包括：
将连接氨基后核酸分子与活化酯和碱性缓冲液混合进行共轭反应；
优选地，所述碱性缓冲液包括碳酸氢钠溶液；
优选地，所述共轭反应的温度为30～40℃，时间为3～10h。
5.根据权利要求1-4任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述氨解反应的温度不高于60℃；
优选地，所述氨解反应的温度为50～60℃。
6.根据权利要求1-5任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸方法，其特征在于，所述氨解反应前还包括前处理的步骤；
优选地，所述前处理包括：
将所述共轭反应的产物和二乙胺-乙腈混合液混合，收集固体物；
优选地，所述二乙胺-乙腈混合液中二乙胺和乙腈的体积比为1:(1～4)。
7.根据权利要求1-6任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸方法，其特征在于，所述氨基具有保护基团；
优选地，所述保护基团包括对甲氧基三苯甲基；
优选地，所述共轭反应前还包括去除所述氨基上保护基团的步骤；
优选地，所述去除所述氨基上保护基团的方法包括：
将连接氨基后核酸分子与三氯乙酸混合，收集固体物。
8.根据权利要求1-7任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用固相合成法从3’端到5’端合成核酸分子，获得3’端连接在固相载体上的核酸分子；
(2)将具有保护基团的氨基连接到所述3’端连接在固相载体上的核酸分子的5’端，将连接氨基后核酸分子与三氯乙酸混合，收集固体物与活化酯混合进行共轭反应；
(3)将所述共轭反应的产物和二乙胺-乙腈混合液混合，收集固体物与氨解液混合进行氨解反应，得到所述可双端共轭不同化合物的核酸。
9.一种可双端共轭不同化合物的核酸，其特征在于，所述可双端共轭不同化合物的核酸由权利要求1-8任一项所述的合成可双端共轭不同化合物的核酸的方法制备得到。
10.权利要求9所述的可双端共轭不同化合物的核酸在制备核酸探针和/或引物中的应用。
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