[发明专利]一种添加絮凝剂辅助毕赤酵母发酵液固液分离的方法

说明书

本发明属于重组蛋白分离纯化制备领域，具体涉及一种添加絮凝剂辅助毕赤酵母发酵液固液分离的方法。本发明毕赤酵母发酵液由于菌体量多且黏度大，因此结合无机絮凝剂和有机絮凝剂，通过其发挥各自不同的作用达到最佳絮凝效果。

技术领域

本发明属于重组蛋白分离纯化制备领域，具体涉及一种添加絮凝剂辅助毕赤酵母发酵液固液分离的方法。

背景技术

随着基因工程技术的发展，大量重组蛋白得到了有效地外源表达。巴斯德毕赤酵母由于具有高稳定、高表达、高分泌、高密度生长以及翻译后修饰功能的特性，使得毕赤酵母表达系统成为使用最多、最广泛的表达系统，被认为是最优发展前景的生产蛋白质的工具之一，适宜扩大为工业规模。外源蛋白被表达出来并不能直接进行应用，还需要对目的蛋白进行纯化，而纯化的第一步就是进行固液分离，也就是制备粗酶液，将菌体与酶液进行分离。提高发酵密度早已成为提高蛋白表达量的一种重要策略，但是由于酵母菌体浓度高且黏度大，为固液分离带来了更大的挑战。

目前，絮凝分离技术主要是通过絮凝剂的添加，使溶液中的微小胶体、颗粒及悬浮物聚集达到分离的效果。絮凝技术能够促使固形悬浮颗粒结合成团并沉降，利于下一步过滤或离心，从而提高固液分离效果及液体澄清度。絮凝效果的好坏决定于絮凝剂种类的选择及絮凝操作方法。絮凝剂主要分为无机、有机和微生物絮凝剂。毕赤酵母发酵液由于菌体量多且黏度大，目前常用的毕赤酵母固液分离的工业方法主要为板框过滤法和离心法，但是由于菌体密度过大，无论哪一种方法达到的效果都有限，分离效率比较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种添加絮凝剂辅助毕赤酵母发酵液固液分离的方法，结合无机絮凝剂和有机絮凝剂，通过其发挥各自不同的作用达到最佳絮凝效果。

本发明的第一个目的在于提供一种辅助毕赤酵母发酵液固液分离的絮凝剂，包括独立包装的聚合氯化铝、硅藻土和阳离子型聚丙烯酰胺。

本发明的第二个目的在于提供一种辅助毕赤酵母发酵液固液分离的絮凝方法，其特征在于，在毕赤酵母发酵液中加入聚合氯化铝、硅藻土和阳离子型聚丙烯酰胺，搅拌均匀后，静置，使絮凝体沉降。

优选的是，在毕赤酵母发酵液中加入聚合氯化铝水溶液，快速搅拌均匀，然后加入硅藻土，慢速搅拌均匀，最后加入阳离子型聚丙烯酰胺，慢速搅拌均匀，静置30min以上。

优选的是，在毕赤酵母发酵液中加入聚合氯化铝水溶液至终浓度为0.01%~5%（m/v），快速搅拌均匀，然后加入质量体积比为0.01%~5%硅藻土，慢速搅拌均匀，最后按照质量体积比加入0.01%~0.5%阳离子型聚丙烯酰胺，慢速搅拌均匀，静置30min以上。

优选的是，所述快速搅拌转速为150~200rpm，所述慢速搅拌转速为20~50rpm。

本发明的第三个目的在于提供一种从毕赤酵母发酵液中分离纯化重组蛋白的方法，根据上文所述辅助毕赤酵母发酵液固液分离的絮凝方法对毕赤酵母发酵液进行预处理，使絮凝体沉降，最后将处理后的发酵液去除菌体，获得所需重组蛋白。

优选的是，所述去除菌体的方法包括高速离心或者板框过滤。

本发明提供了一种对毕赤酵母发酵液预处理进行固液分离并得到分离重组蛋白的方法，先将聚合氯化铝溶于水制备成溶液，在毕赤酵母发酵液中加入聚合氯化铝溶液至终浓度为0.01%~5%，快速搅拌均匀，然后加入质量体积比为0.01%~5%硅藻土，慢速搅拌均匀，最后按照质量体积比加入0.01%~0.5%阳离子型聚丙烯酰胺，慢速搅拌均匀，静置30min以上，使絮凝体沉降，最后将处理后的发酵液通过高速离心或者板框过滤的方式去除菌体，获得所需重组蛋白。