[发明专利]提取高脂奶制品中的微生物基因组DNA的方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种提取高脂奶制品中的微生物基因组DNA的方法和试剂盒，利用本发明的提取方法和试剂盒提取高脂奶制品中微生物基因组DNA，制得的DNA核酸得率高、纯度好，有利于后续对核酸的检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体地，涉及一种提取高脂奶制品中的微生物基因组DNA的方法和试剂盒。

背景技术

奶酪是一种生活中常见的食品，主要由对人类有益的乳酸菌发酵形成。由于奶酪是发酵产物，因而在奶酪生产、运输过程中，极有可能出现被微生物污染的情况。当一些对人体有害的致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌等出现在奶酪中，若食用了这些携带致病菌的奶酪，人体将会出现呕吐、腹泻、发烧等病症，严重的话会危害生命。

因此，奶酪的食品安全问题是人们长期关注的重点，并且迫切需要对奶酪样本进行微生物检测，其中对奶酪食品安全的检测主要是对奶酪中微生物的基因组DNA进行检测，而检测微生物基因组DNA之前，需要对奶酪中的微生物进行核酸提取，能否获得高质量的基因组DNA，对检测结果的准确性具有重要影响。

对于奶酪中微生物基因组DNA提取，目前没有统一的标准，利用通用的微生物提取试剂盒提取的奶酪微生物gDNA核酸浓度、完整性不高，且提取的核酸容易抑制下游的检测实验。因此，本领域迫切需要开发一种能够有效提取奶酪中微生物基因组DNA的技术，以满足检测需求。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种提取高脂奶制品中微生物基因组DNA的方法和试剂盒，利用本发明的提取方法，提取纯化后的DNA核酸得率高、纯度好，且提取的核酸中PCR抑制物低，有利于后续对核酸进行建库、测序检测等。

本发明的第一方面，提供了一种用于提取高脂奶制品中微生物基因组DNA的试剂盒，包括：

研磨珠、裂解液、增效剂、结合液、核酸提取磁珠、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。

在另一优选例中，所述研磨珠为粒径0.1-0.3mm的玻璃珠。优选的，研磨珠为Bioblock的0.1mm玻璃珠。

在另一优选例中，所述裂解液包括：0.01-0.5M Tris-HCl、0.01-0.2M EDTA、0.05-0.5M NaCl、0.01-0.5M NaH₂PO₄、1-10M硫氰酸胍，裂解液的pH值为7.0-9.0。优选的，所述裂解液的成分为：0.1M Tris-HCl、0.1M EDTA、0.25M NaCl、0.2MNaH₂PO₄、4M硫氰酸胍，所述裂解液的pH值为8.0。

在另一优选例中，所述增效剂包括：0.05-0.5M FeCl₃、10-30％(w/v)乙酸钾、0.01-0.5M Tris-HCl，增效剂的pH值为5.0-7.0。优选的，所述增效剂的成分为：0.25MFeCl₃、25％(w/v)乙酸钾、0.2M Tris-HCl，所述增效剂的pH值为6.0。

在另一优选例中，所述结合液包括：0.05-0.2M Tris-HCl、0.1-10M异硫氰酸胍、2-20mM EDTA、0.2-4％(w/v)TritonX-100、20-40％(v/v)异丙醇。优选的，所述结合液的成分为：0.1M Tris-HCl、6M异硫氰酸胍、0.01M EDTA、1％(w/v)TritonX-100、30％(v/v)异丙醇，所述结合液的pH为7.5。

在另一优选例中，所述核酸提取磁珠为：体积分数70-80％(w/v)的超顺磁微球，超顺磁微球的粒径介于15-45nm，磁珠液的pH值为5.0-6.0。优选的，所述磁珠液为Promega的磁珠。