[发明专利]提取高脂奶制品中的微生物基因组DNA的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种高脂奶制品用于提取高脂奶制品中微生物基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

研磨珠、裂解液、增效剂、结合液、核酸提取磁珠、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液，其中：

所述裂解液包括：0.01-0.5M Tris-HCl、0.01-0.2M EDTA、0.05-0.5M NaCl、0.01-0.5MNaH₂PO₄、1-10M硫氰酸胍，所述裂解液的pH值为7.0-9.0；

所述增效剂包括：0.05-0.5M FeCl₃、10-30％(w/v)乙酸钾、0.01-0.5M Tris-HCl，增效剂的pH值为5.0-7.0；

所述结合液包括：0.05-0.2M Tris-HCl、0.1-10M异硫氰酸胍、2-20mM EDTA、0.2-4％(w/v)TritonX-100、20-40％(v/v)异丙醇；

所述漂洗液1包括：0.1-0.5M Tris-HCl、0.1-2M氯化钠、0.5-10M盐酸胍、0.01-0.1MEDTA、30-70％(v/v)无水乙醇，所述漂洗液1的pH值为6.0-8.0；

所述漂洗液2包括：0.1-0.5M Tris-HCl、75％-90％(v/v)无水乙醇，所述漂洗液2的pH值为6.0-8.0。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述研磨珠为粒径0.1-0.3mm的玻璃珠。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液的成分为：0.1MTris-HCl、0.1MEDTA、0.25M NaCl、0.2M NaH₂PO₄、4M硫氰酸胍，所述裂解液的pH值为8.0。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述增效剂的成分为：0.25MFeCl₃、25％(w/v)乙酸钾、0.2M Tris-HCl，所述增效剂的pH值为6.0。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述结合液的成分为：0.1MTris-HCl、6M异硫氰酸胍、0.01M EDTA、1％(w/v)TritonX-100、30％(v/v)异丙醇，所述结合液的pH为7.5。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取磁珠为：体积分数70-80％(w/v)的超顺磁微球，超顺磁微球的粒径介于15-45nm，磁珠液的pH值为5.0-6.0。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液1的成分为：0.15MTris-HCl、0.8M NaCl、5M盐酸胍、0.01M EDTA、和55％(v/v)无水乙醇，所述漂洗液1的pH值为8.0；和/或

所述漂洗液2的成分为：0.15M Tris-HCl、80％(v/v)无水乙醇、所述漂洗液2的pH值为8.0。

8.一种提取高脂奶制品中微生物基因组DNA的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：以高脂奶制品为原料，使用权利要求1所述的试剂盒提取高脂奶制品中微生物基因组DNA，提取操作过程包括：

称取高脂奶制品样本加入所述研磨珠和所述裂解液，进行研磨、裂解，离心取上清液A；

所述上清液A中加入所述增效剂，涡旋离心后取上清液B；

所述上清液B中加入所述核酸提取磁珠和所述结合液进行孵育结合，取沉淀；

所述沉淀依次经过漂洗液1和漂洗液2分别漂洗两次后，留下磁珠沉淀；

所述磁珠沉淀经过洗脱液洗脱获得高脂奶制品微生物基因组DNA。

9.一种高脂奶制品微生物的检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：利用权利要求8所述的方法提取获得高脂奶制品微生物基因组DNA，然后使用目的基因的特异性引物和/或探针进行PCR检测。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR检测方法为实时荧光定量PCR检测；和/或

所述目的基因为16S基因、Bif基因、和/或Bth基因。