[发明专利]一种高山美利奴羊AMH基因CNV标记辅助检测羊毛性状的方法及应用

说明书

本发明属于分子生物学检测技术领域，具体涉及一种高山美利奴羊AMH基因CNV标记辅助检测羊毛性状的方法及应用，本发明提供了一种与高山美利奴羊羊毛性状相关的CNV标记，位于高山美利奴羊AMH基因外显子区域chr5：18901101‑18905300，并提供了检测CNV标记的方法：以高山美利奴羊基因组DNA为模板，以引物对P1和P2分别通过qPCR扩增AMH基因的CNV区域以及内参基因，定量高山美利奴羊AMH基因的拷贝数变异；所述方法操作简单，准确可靠。本发明可以检测高山美利奴羊羊毛性状密切相关的CNV标记，用于高山美利奴羊早期选择，提高选种准确性，缩短培育周期，加快培育进程。

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，具体涉及一种高山美利奴羊AMH基因CNV标记辅助检测羊毛性状的方法及应用。

背景技术

羊毛是指覆盖在羊体表面的一层具有纺织价值的纤维，是皮肤的衍生物。羊毛是毛纺工业的主要原料，约占毛纺原料的97％，主要用来加工服装面料、毛线、毛毯等产品。在羊毛生产和育种实践中，羊毛性状是重要的经济性状，主要包括毛长、产毛量、平均纤维直径、弯曲度、断裂强度、伸度、净毛率等多个指标，与织造产品和经济效益密切相关。由于人口增长，羊毛的需求已经超过了供给。随着市场需求的变化，生产优质羊毛已成为山羊育种的主要目标。

高山美利奴羊是以甘肃高山细毛羊为母本，澳洲美利奴羊为父本，综合利用现代先进生物技术和育种技术，经过20年育成的世界首例适应海拔2400～4070m高山寒旱生态区，羊毛纤维直径主体为19.0～21.5μm的美利奴羊新品种。羊毛形状也是决定其经济价值的一项重要指标，并且羊毛形状的客观检验在羊毛销售中越来越受到重视，它与纺织性能、育种和生产三者间结合的越来越紧密。

与传统育种方法相比，分子标记辅助选择方法具有许多优势，例如可以明显缩短世代间隔，提高选择准确性，提前选择时间，同时对它低遗传力性状、早期未表现的性状、活体难以度量或者度量难度较大、成本较高的性状，有良好的选择效果。拷贝数变异(CopyNumber Variations，CNVs)，作为一种新发现的基因组亚显微水平结构变异类型，是指基因组DNA中较大片段的缺失或重复现象，涉及的片段大小在50bp到数Mb之间，包括拷贝数增加(Copy number gain)和拷贝数减少(Copy number loss)。

CNV常用的检测方法主要分为在全基因组范围内检测未知CNV和用于定点检测或验证已知CNV两类。基因组未知CNV常用的检测方法有芯片法和测序法，但是，这两种方法受检测平台的局限，而且价格昂贵；对于已确定的CNV的检测，通常是采用基于PCR技术和杂交技术的一些方法。其中，实时荧光定量PCR(QPCR)最为常用。QPCR通过对目的基因(具有拷贝数变异)及参考基因(无拷贝数变异)进行相对定量，根据2^-ΔΔCt方法统计检测样本候选基因的拷贝数。该方法操作简单，普适度高，速度快，受认同程度高。

抗苗勒氏管激素(Anti-Mullerian hormone，AMH)是由雄性睾丸支持细胞和雌性卵巢颗粒细胞分泌的一种仅在性腺中表达的糖蛋白，是TGFβ超家族(Transforming growthfactor beta superfamily，TGFβ超家族)的一员，具有调节细胞分化和发育，促进苗勒氏管退化等作用。同时AMH还可以作为反刍动物超数排卵的预测指标，在反刍动物育种中起到了良好的作用，但目前尚未见有关AMH基因CNV与绵羊羊毛性状的关联性研究的文献报道。

发明内容

本发明提供了一种检测高山美利奴羊AMH基因CNV标记的方法及应用，尤其涉及一种基于QPCR技术检测高山美利奴羊AMH基因CNV标记的方法及其应用。具体包括以下内容：

第一方面，本发明提供了一种与高山美利奴羊羊毛净毛率性状相关的CNV标记，所述CNV标记位于高山美利奴羊AMH基因外显子区域chr5：18901101-18905300。