[发明专利]一种高山美利奴羊AMH基因CNV标记辅助检测羊毛性状的方法及应用

权利要求书

1.检测高山美利奴羊羊毛净毛率性状相关的CNV标记的试剂在检测高山美利奴羊羊毛净毛率或高山美利奴羊羊毛净毛率性状选育中的应用；所述CNV标记位于高山美利奴羊AMH基因外显子区域chr5：18901101-18905300，参考序列的GenBank登录号为NC_019462.2；所述试剂扩增所述CNV标记和内参基因ANKRD1；

所述试剂包括CNV标记的扩增引物对P1：

上游引物F1：5'-AAGCCAGCACCTCCCTACTCC-3'；

下游引物R1：5'-CCAGCCTCACTATGCAGAACCAC-3'；

和内参基因ANKRD1的扩增引物对P2：

上游引物F2：5'-TCTTGTACCGATTCAGCC-3'；

下游引物R2：5'-TTCACTCGTTTATTGGGAT-3'；

扩增结果根据2×2^-ΔΔCt法定义拷贝数变异类型：2×2^-ΔΔCt＝2为正常型，2×2^-ΔΔCt2为插入型，2×2^-ΔΔCt2为缺失型；所述正常型和缺失型的羊毛净毛率显著高于插入型，同时所述正常型的羊毛净毛率显著高于缺失型。

2.一种与高山美利奴羊羊毛净毛率性状相关的CNV标记的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

以高山美利奴羊的基因组DNA为模板，通过QPCR分别扩增高山美利奴羊羊毛净毛率性状相关的CNV标记和内参基因ANKRD1；所述CNV标记位于高山美利奴羊AMH基因外显子区域chr5：18901101-18905300，参考序列的GenBank登录号为NC_019462.2；

所述CNV标记的扩增引物对P1为：

上游引物F1：5'-AAGCCAGCACCTCCCTACTCC-3'；

下游引物R1：5'-CCAGCCTCACTATGCAGAACCAC-3'；

所述内参基因ANKRD1的扩增引物对P2为：

上游引物F2：5'-TCTTGTACCGATTCAGCC-3'；

下游引物R2：5'-TTCACTCGTTTATTGGGAT-3'；

根据2×2^-ΔΔCt法定量结果将拷贝数变异分为三类：2×2^-ΔΔCt＝2为正常型，2×2^-ΔΔCt2为插入型，2×2^-ΔΔCt2为缺失型；所述正常型和缺失型的羊毛净毛率显著高于插入型，同时所述正常型的羊毛净毛率显著高于缺失型。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述QPCR扩增体系包括：TopGreen qPCR SuperMix 10μL，上、下游引物各0.4μL，基因组DNA 1μL，Nuclease-free Water8.2μL。

4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述QPCR所用的反应程序为：

(1)预变性：94℃，30s；

(2)扩增反应：94℃，5s；之后58℃，15s；72℃，10s；45个循环；

(3)绘制熔解曲线：95℃，5s，之后从65℃到95℃，+0.5℃，5s。