[发明专利]一种CCND1基因CNV标记辅助检测高山美利奴羊羊毛性状的方法及其应用

权利要求书

1.检测高山美利奴羊体侧毛长性状相关的CNV标记的试剂在检测高山美利奴羊体侧毛长或高山美利奴羊早期育种中的应用；所述CNV标记位于高山美利奴羊CCND1基因外显子区域chr21：46061901-46064400；所述试剂扩增所述CNV标记和内参基因ANKRD1；

所述试剂包括CNV标记的扩增引物对P1：

上游引物F1：5'-CCCCGCCGAGTTTGAATTCCTG-3'；

下游引物R1：5'-ATTTCCCCAGACGTCATC-3'；和

内参基因ANKRD1的扩增引物对P2：

上游引物F2：5'-TCTTGTACCGATTCAGCC-3'；

下游引物R2：5'-TTCACTCGTTTATTGGGAT-3'；

扩增的结果根据2×2^-ΔΔCt法定义拷贝数变异类型：2×2^-ΔΔCt＝2为正常型，2×2^-ΔΔCt2为插入型，2×2^-ΔΔCt2为缺失型；所述正常型的体侧毛长显著高于插入型和缺失型。

2.一种与高山美利奴羊体侧毛长性状相关的CNV标记的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

以高山美利奴羊的基因组DNA为模板，通过QPCR分别扩增高山美利奴羊体侧毛长性状相关的CNV标记和内参基因ANKRD1；所述CNV标记位于高山美利奴羊CCND1基因外显子区域chr21：46061901-46064400；

所述CNV标记的扩增引物对P1：

上游引物F1：5'-CCCCGCCGAGTTTGAATTCCTG-3'；

下游引物R1：5'-ATTTCCCCAGACGTCATC-3'；

所述内参基因ANKRD1的扩增引物对P2：

上游引物F2：5'-TCTTGTACCGATTCAGCC-3'；

下游引物R2：5'-TTCACTCGTTTATTGGGAT-3'；

根据2×2^-ΔΔCt法定量结果将拷贝数变异分为三类：2×2^-ΔΔCt＝2为正常型，2×2^-ΔΔCt2为插入型，2×2^-ΔΔCt2为缺失型；所述正常型的体侧毛长显著高于插入型和缺失型。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述QPCR扩增体系包括：TopGreen qPCR SuperMix 10μL，上、下游引物各0.4μL，基因组DNA 1μL，Nuclease-freeWater8.2μL。

4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述QPCR所用的反应程序为：

(1)预变性：94℃，30s；

(2)扩增反应：94℃，5s；之后58℃，15s；72℃，10s；45个循环；

(3)绘制熔解曲线：95℃，5s，之后从65℃到95℃，+0.5℃，5s。