[发明专利]一种鉴别红松无性系的SSR标记引物组及指纹图谱的构建方法和应用

说明书

一种鉴别红松无性系的SSR标记引物组及指纹图谱的构建方法和应用，它涉及SSR分子标记技术领域，本发明提供了SSR标记引物组，并基于其构建指纹图谱：(1)红松总DNA提取，(2)利用SSR引物进行PCR扩增，(3)PCR扩增产物毛细管电泳，(4)指纹图谱构建；其中：步骤(2)利用公开的11对SSR引物进行红松DNA的PCR扩增，所得产物经毛细管电泳检测所得的带型结果，组合形成每个无性系的SSR指纹图谱，根据指纹图谱的差异，再区分无性系。本发明可以快速、准确、高效的从分子水平为红松无性系鉴定、良种选育和遗传改良提供可靠的依据，为中国红松遗传资源保存、评价与利用提供参考。

技术领域

本发明涉及SSR分子标记技术领域，具体涉及一种鉴别红松无性系的SSR标记引物组及指纹图谱的构建方法和应用。

背景技术

红松(Pinμskoraiensis)，松科(Pinaceae)松属(Pinμs L)，国家重点保存的二级野生植物，也是我国东北林区的乡土树种。原产于我国东北长白山到小兴安岭，常同鱼鳞松、红皮云杉组成混交林。耐寒性强，喜微酸性土或中性土。木材轻软、细致、纹理直、耐腐蚀性强，为建筑、桥梁、枕木、家具优良用材；树皮可提取栲胶，树干可采松脂，是能够提供木材，纸浆和油脂的良好树种，此外红松的果实由于具有非常高的营养价值，含有大量的粗蛋白，粗脂肪，多糖和粗纤维以及维生素，矿物质和微量元素而成为最受欢迎的松仁产品，为产地主要造林树种，又为观赏树。

传统的林木鉴定主要依靠营养器官和生殖器官的形态性状差异，受环境和生长阶段的影响很大，但是无性系间的形态差异较小，一些外观形态易受到环境因素的影响，因此难以从形态学上对不同无性系进行鉴定，极易出现无意识的混种、混系等现象，或者有意识的侵权现象，给生产、科研和良种保护及推广等工作带来极大的不方便。随着分子生物学的不断发展，DNA分子标记被广泛应用于种质资源鉴定和揭示树木种内的遗传多样性等。

由于SSR标记可以从分子水平进行鉴定，能够精确到单个核苷酸水平，稳定性高、重复性好、多态性好，更有说服力，而且能够鉴定所检测位点是纯合还是杂合。合成荧光引物进行PCR扩增，然后用毛细管电泳仪对产物进行毛细管电泳，根据不同的峰值检测多态性并构建指纹图谱，此种方法比聚丙烯酰胺凝胶电泳法更易于实现自动化读值，实现规模化检测，且准确可靠。然而，到目前为止国内外尚没有利用荧光SSR标记技术对红松无性系鉴别及指纹图谱构建的系统性应用。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种鉴别红松无性系的SSR标记引物组及指纹图谱的构建方法和应用。

本发明的一种基于毛细管电泳技术鉴别红松无性系的SSR标记引物组，所述的引物组如下：

标记p49上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；

标记p70上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；

标记p72上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；

标记p79上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；

标记p82上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；

标记EPD11上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQID NO.12所示；

标记NFPK-34上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；

标记P6*上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；