[发明专利]一种CK-MB抗体及其制备方法、CK-MB检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种CK‑MB抗体及其制备方法、CK‑MB检测试剂盒，CK‑MB抗体的制备方法包括以下步骤：S10：获得原始CK‑MB抗体，对原始CK‑MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，获得改造后的氨基酸序列一；S20：优化氨基酸序列一，合成优化后的氨基酸序列一，获得氨基酸序列二；S30：构建重组表达载体：将氨基酸序列二插入质粒，获得重组表达载体；S40：抗体的重组表达：将重组表达载体转染至哺乳动物表达细胞中进行瞬时表达，纯化，得到CK‑MB抗体。本发明解决了现有CK‑MB抗体的稳定性不佳的技术问题，实现了提高CK‑MB抗体的稳定性的技术效果。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种CK-MB抗体及其制备方法、CK-MB检测试剂盒。

背景技术

肌酸激酶同工酶(CK-MB)，是心肌细胞中特有的肌酸激酶，为肌酸激酶的亚型，只存在于心肌细胞中，其他组织器官中不存在，是心肌损伤的特异性标志物，因此在临床上，血清中CK-MB水平的定量化检测可以辅助诊断心肌损伤。目前，采用CK-MB检测试剂盒能够在体外对人血清或血浆中CK-MB进行定量分析，而CK-MB检测试剂盒中作为原料的CK-MB抗体的稳定性直接影响试剂的产品性能。

存在的问题是：现有CK-MB抗体的稳定性不佳。

发明内容

本发明解决了现有CK-MB抗体的稳定性不佳的技术问题，实现了提高CK-MB抗体的稳定性的技术效果。

为解决上述问题，本发明提供一种CK-MB抗体的制备方法，包括以下步骤：S10：获得原始CK-MB抗体，对原始CK-MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，获得改造后的氨基酸序列一；S20：优化氨基酸序列一，合成优化后的氨基酸序列一，获得氨基酸序列二；S30：构建重组表达载体：将氨基酸序列二插入质粒，获得重组表达载体；S40：抗体的重组表达：将重组表达载体转染至哺乳动物表达细胞中进行瞬时表达，纯化，得到CK-MB抗体。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：重组蛋白在生产、运输、储存等过程中，容易产生聚体和发生多种降解。其中蛋白质聚集可能对抗体的质量和功效有显著的负面影响，抗体聚集可能会减弱蛋白生物活性。因此，对原来的CK-MB抗体进行改造，以减少聚集体的产生，进而提高CK-MB抗体的稳定性。具体的，抗体FC片段是抗体的恒定区，在这个恒定区域内氨基酸的序列在不同的抗体中呈现相同的状态，抗体的不同类型，由抗体FC片段的特异性结构来进一步决定。将原来的CK-MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，其可以通过蛋白序列数据库多序列比对实现，找到容易产生聚集的氨基酸进行合理的定点突变，再将改造后的序列进行合成，构建质粒，转染后进行顺转表达，最终纯化得到的CK-MB抗体具有更好的稳定性。

在本发明的一个实例中，对原始CK-MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，包括以下步骤：S11：将原始CK-MB抗体重链FC片段的第74位P氨基酸替换为T氨基酸，第75位R氨基酸替换为W氨基酸，第276位N氨基酸替换为D氨基酸，第278位N氨基酸替换为D氨基酸。

与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：通过对上述原始CK-MB抗体重链FC片段的氨基酸位点进行定点突变，能够减少聚集体的产生，进而提高CK-MB抗体的稳定性。

在本发明的一个实例中，优化氨基酸序列一，包括以下步骤：S21：对氨基酸序列一进行抗体可变区分析，将高聚集倾向区域中的部分氨基酸进行定点突变。