[发明专利]一种CK-MB抗体及其制备方法、CK-MB检测试剂盒在审
| 申请号： | 202211492991.0 | 申请日： | 2022-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN115710316A | 公开（公告）日： | 2023-02-24 |
| 发明（设计）人： | 邹炳德;宋丹丽;唐云霞;宋张晴;丁建静;袁姗姗 | 申请（专利权）人： | 美康生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/40 | 分类号： | C07K16/40;C12N15/85;G01N33/573 |
| 代理公司： | 浙江中桓凯通专利代理有限公司 33376 | 代理人： | 金明学 |
| 地址： | 315000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 ck mb 抗体 及其 制备 方法 检测 试剂盒 | ||
1.一种CK-MB抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10：获得原始CK-MB抗体，对所述原始CK-MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，获得改造后的氨基酸序列一；
S20：优化所述氨基酸序列一，合成优化后的所述氨基酸序列一，获得氨基酸序列二；
S30：构建重组表达载体：将所述氨基酸序列二插入质粒，获得所述重组表达载体；
S40：抗体的重组表达：将所述重组表达载体转染至哺乳动物表达细胞中进行瞬时表达，纯化，得到所述CK-MB抗体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述对所述原始CK-MB抗体重链的FC片段氨基酸序列进行定点突变，包括以下步骤：
S11：将所述原始CK-MB抗体重链FC片段的第74位P氨基酸替换为T氨基酸，第75位R氨基酸替换为W氨基酸，第276位N氨基酸替换为D氨基酸，第278位N氨基酸替换为D氨基酸。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述优化所述氨基酸序列一，包括以下步骤：
S21：对所述氨基酸序列一进行抗体可变区分析，将高聚集倾向区域中的部分氨基酸进行定点突变。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述将高聚集倾向区域中的部分氨基酸进行定点突变，包括以下步骤：
S22：将所述原始CK-MB抗体原轻链的第54位L氨基酸替换为R氨基酸，第74位的T氨基酸替换为S氨基酸，第76位的T氨基酸替换为N氨基酸，第85位的V氨基酸替换为T氨基酸。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述将高聚集倾向区域中的部分氨基酸进行定点突变，还包括以下步骤：
S23：将所述原始CK-MB抗体原重链的第20位I氨基酸替换为L氨基酸，第79位V氨基酸替换为A氨基酸，第95位I氨基酸替换为Y氨基酸，第111位的L氨基酸替换为S氨基酸。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物表达细胞为CHO细胞。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纯化采用Protein G层析纯化。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：
S50：采用Elisa法检测所述CK-MB抗体的活性。
9.一种CK-MB抗体，其特征在于，所述CK-MB抗体通过权利要求1-8中任一项所述的制备方法得到。
10.一种CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述CK-MB检测试剂盒包括权利要求9所述的CK-MB抗体。
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