[发明专利]一种用于抗肿瘤的组合物、重组质粒组合物及其应用

说明书

本申请公开了一种用于抗肿瘤的组合物、重组质粒组合物及其应用，该组合物中包括程序性死亡受体1的抑制剂和多种细胞因子，两者分别从不同途径清除了抗肿瘤因素，通过联合应用，有效抗肿瘤生长。本申请提供的重组质粒组合物包括多个重组质粒，这些重组质粒均能在机体内高效、稳定地表达出前述组合物中的抗肿瘤功能组分，包括PD‑1v、IL‑2/15、IL‑12及GM‑CSF等。该重组质粒组合物也可以作为抗肿瘤药物用于抗肿瘤治疗。

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种用于抗肿瘤的组合物、重组质粒组合物及其应用。

背景技术

肿瘤细胞通过多种途径抑制机体抗肿瘤免疫反应，使得肿瘤细胞逃避免疫识别和杀伤。近年来随着肿瘤免疫逃避机制的进一步明确，人们不断探索靶向肿瘤免疫逃避的干预措施，重新调动免疫应答，吸引免疫细胞进入肿瘤组织让“冷肿瘤”变为“热肿瘤”，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应。

肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)是调控肿瘤发展、生长、侵袭和远处转移的重要部位，在诱导肿瘤免疫逃逸中发挥关键作用。研究发现多种类型肿瘤细胞，如黑色素瘤、结肠癌、肺癌、卵巢癌、头颈鳞状细胞癌和胶质瘤通过高表达PD-Ls(包括PD-L1和PD-L2)，与T淋巴细胞表面的负调控受体PD-1(programmed death 1,PD-1)作用抑制T细胞的杀伤功能、增加肿瘤特异性CTL(cytotoxic T lymphocyte)的凋亡，使肿瘤逃避免疫监视与杀伤。而PD-1是继CTLA-4发现之后的T细胞表面重要负调控受体，PD-1与PD-Ls的结合本是防止T细胞过度激活，避免T细胞过度激活导致炎症损伤。然而，肿瘤细胞通过高表达PD-Ls诱导浸润淋巴细胞功能障碍和耗竭，使肿瘤逃避免疫监视与杀伤。近年来有研究表明，以PD-1/PD-Ls为靶点的抗体封阻，即T细胞免疫检测点阻断，切断PD-1/PD-Ls信号通路，可以逆转效应T细胞功能障碍和耗竭，恢复T细胞的抗肿瘤活性。

除了T淋巴细胞，其它先天性免疫细胞，包括自然杀伤(Natural killer,NK)细胞、NKT细胞、巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞和中性粒细胞也在控制肿瘤生长过程中发挥重要作用。众所周知，肿瘤细胞下调表达或缺失MHC-Ⅰ类分子，缺乏提呈肿瘤相关抗原能力，使得肿瘤细胞呈现低免疫原性表型逃避机体的免疫监视。表达在正常细胞表面的MHC-Ⅰ类分子是避免自身NK细胞杀伤攻击的主要分子。由此，NK细胞识别MHC低表达的肿瘤细胞，在肿瘤微环境中具有强大的抗肿瘤作用。研究发现，一方面，NK细胞可以在IL-15、IL-2的作用下迁移至肿瘤微环境，提高NK细胞的细胞毒性和对肿瘤细胞的识别。另一方面，NK细胞具有免疫调节潜力，能够分泌细胞因子和趋化因子IFN-γ、TNF-α、CCL5、XCL1和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)调动适应性和固有免疫细胞的抗肿瘤反应。

吸引免疫细胞进入肿瘤微环境，以及免疫细胞之间的相互作用、细胞的再定位、功能活化极大地影响抗肿瘤免疫应答。在早期研究中人们尝试使用单一的细胞因子如IL-12、IFN-γ抗肿瘤，但绝大多数疗效不显著。

在肿瘤微环境内高效表达细胞因子需要良好的载体。病毒载体虽然转染效率高，但是由于存在潜在安全性隐患，例如某些逆转录病毒诱发白血病发生，且病毒载体容量有限，使其应用受到很大的限制。早在1990年，Science文章报道质粒载体是一种极具前景的体内转染载体，可直接注入肌肉组织，并且能在体内实现基因表达。目前哺乳动物细胞表达载体通常采用CMV启动子进行外源基因的表达，表达量相对原核系统T7启动子普遍低很多。

因此，提供一种协同免疫抗肿瘤生长的药物组合物，以及能稳定表述该药物组合物的表达载体，以提高抗肿瘤疗效是亟需解决的技术问题。

发明内容