[发明专利]一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用

说明书

本发明公开了一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用。一种带状疱疹病毒gE蛋白，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。两种包含上述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，所述两种重组腺病毒分别以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L为骨架载体。经过体外，真核鉴定外源蛋白的表达，重组腺病毒Sad23L‑gE和Ad49L‑gE的纯化，最后在小鼠上进行免疫评价，发现带状疱疹疫苗Sad23L‑gE或Ad49L‑gE单独免疫小鼠，均能够诱导产生特异性针对gE抗原的结合抗体，同时也产生了特异性细胞反应。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用。

背景技术

带状疱疹（herpes zoster，HZ）是由水痘-带状疱疹病毒（varicella-zostervirus，VZV）感染所致。在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，高龄、免疫缺陷、使用免疫抑制剂等患者中多高发。引起带状分布的簇集水泡，并伴有明显神经痛，疼痛评级可达7级以上，属于重度疼痛，严重者甚至呼吸的起伏都能引起严重疼痛，被称为“会呼吸的痛”，极大的影响患者生活质量。

全球普通人群带状疱疹的发病率为（3-5）／1,000人年，并以2.5%-5.0%的速度逐年递增，带状疱疹发病率随着年龄增长而升高-50岁后随着年龄增长VZV特异性细胞免疫功能逐渐降低，带状疱疹的发病率、住院率和病死率均逐渐升高。据估算我国50岁及以上人群每年新发带状疱疹病例在150万左右，并且随着人口老龄化带状疱疹负担日益增加，同时每年还有近300万人受带状疱疹后遗神经痛影响。由于带状疱疹目前为止治疗方法有限，且痊愈后的复发率达到1%-6%，因此接种疫苗时预防带状疱疹的有效手段。目前国内仅进口GSK一家上市，本土的带状疱疹疫苗研发方向主要是减毒活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗 ，均还处于临床(前)研发阶段。因此安全有效的预防性带状疱疹疫苗的研制是非常有必要的。

复制缺陷型腺病毒载体具有可诱导产生广泛的体液和细胞免疫反应，宿主范围广，不整合基因组中，高水平表达外源蛋白等优点，被广泛的应用于疫苗的研制中。但是人群中预存的高水平的针对人腺病毒（Ad5/Ad2）的免疫反应限制了腺病毒载体的应用。目前带状疱疹疫苗的研发中基于病毒载体平台的路线，目前还处于临床前研究阶段。先前使用的Ad5型载体研发的新冠疫苗临床试验证实载体本身的预存免疫会影响疫苗的效果，因此开发安全有效低预存免疫的新型腺病毒载体带状疱疹疫苗是非常有必要的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

第一方面，一种带状疱疹病毒gE蛋白，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

第二方面，两种包含上述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，所述两种重组腺病毒分别以黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒Sad23L和人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒Ad49L为骨架载体。

第三方面，基于第二方面提供的重组腺病毒的构建方法，具体地包括以下步骤：构建含有上述gE蛋白的核苷酸序列的穿梭质粒载体pShuttle2-CMV-gE；

将所述穿梭质粒载体pShuttle2-CMV-gE与Sad23L进行DNA组装，得黑猩猩型腺病毒SAd23型复制缺陷型重组腺病毒质粒；

将所述穿梭质粒载体pShuttle2-CMV-gE与Ad49L进行DNA组装，得人稀有血清型腺病毒Ad49型复制缺陷型重组腺病毒质粒；