[发明专利]一种核酸提取试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种核酸提取试剂盒，涉及生物技术领域。试剂盒包含裂解液1、裂解液2、结合液、漂洗液、洗脱液和磁珠，采用半自动化提取得到洗脱核酸，通过紫外分光光度计进行质量检测。该试剂盒能够有效提高核酸得率，缩短核酸纯化时间，其中的核酸提取试剂可在室温下稳定储存2年以上。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种核酸提取试剂盒及其应用。

背景技术

核酸是生物的主要遗传物质。在分子生物学和医学检测等领域中以DNA为研究对象或目标的研究甚是广泛。而从不同生物样本(如：排泄物、组织、体液、病原体等)中获得高质量的核酸则是开展相关研究实验的基础。当前，针对核酸提取纯化的手段大致可分为如下几类：醇类沉淀、硅胶基质柱吸附、磁性材料的修饰基团吸附等。其中磁珠法作为可应用自动化的核酸提取方法，基本原理是基于磁珠在高盐溶液中可以对核酸进行特异性吸附，经过多次漂洗去除蛋白质和多糖等杂质，最后通过在低盐溶液中洗脱，从而获得适用于后续研究的核酸产物。

当前，在核酸纯化质量方面，不同的核酸提取试剂获得的核酸质量有着显著的差异。由于外源及内源性核酸酶的存在及其酶活性稳定等原因，使得提取高质量的核酸较为困难。目前常用的核酸提取技术存在提取流程复杂、时间长、核酸降解严重、得率较低或重复性不佳等无法同时兼顾的问题，使得其无法完全满足临床检测的需求，尤其在核酸载量较低的微小残留病检测、早期复发监测等领域尤为迫切。因此研发出一种快速高效、高得率的核酸提取试剂显得尤为重要。

中国发明专利CN112195177A公开了一种核酸提取方法及试剂盒，包括裂解液、抑制成分去除液、蛋白质去除剂、结合缓冲液、漂洗液、离子洗涤液。其中，裂解液为异硫氰酸胍、N-月桂酰肌氨酸钠盐，抑制成分去除液包括十二水合硫酸铝铵和PVPP的混合液以及乙酸铵，此方法采用所述核酸化学裂解液化学裂解样本，再经杂质去除、核酸吸附、洗涤、洗脱后，收集得到核酸。

中国发明专利CN101792756A公开了一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法，其中裂解缓冲液的组成为三羟甲基氨基甲烷、EDTA和氯化钠。此方法将裂解缓冲液加入待测材料中，将材料研碎，加入蛋白酶K，孵育离心，得脱氧核糖核酸溶液。此方法的优点在于能够一步法提取DNA，不需要酶解和长时间孵育，一次性裂解材料，材料范围广，操作时间短。

但目前的核酸提取方法虽然能够有效地获取DNA，但针对特定样本的核酸得率较低，试剂盒提取稳定性不佳，部分方法存在核酸纯化质量较低，不能用于后续的qPCR和二代测序分析的问题。

针对现有的核酸提取试剂盒存在的稳定性差，核酸得率较低等问题，应寻找一种稳定性好、核酸得率高、能稳定存储的试剂盒，使得该试剂盒能够实现更好的核酸提取功能。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种试剂盒。该试剂盒能够有效提高核酸得率，缩短核酸纯化时间，其中的核酸提取试剂可在室温下稳定储存2年以上。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括裂解液1、裂解液2、结合液、漂洗液、洗脱液和磁珠。

所述的裂解液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷、EDTA和Triton X-100；

所述的裂解液2包括蛋白酶K和SDS；

所述的结合液包括盐酸胍、Tris-HCl和异丙醇；

所述的漂洗液包括乙醇和Tris-HCl；

所述的洗脱液包括Tris-HCl和EDTA；

所述的磁珠选自超顺磁性二氧化硅磁珠、二氧化钛磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠中的至少一种；