[发明专利]利用单宁粗提物富集盐沼土壤反硝化功能微生物的方法在审

专利信息
申请号: 202211410830.2 申请日: 2022-11-11
公开(公告)号: CN115747296A 公开(公告)日: 2023-03-07
发明(设计)人: 张秋芳;黄卫红;张亮亮;徐曼 申请(专利权)人: 泉州师范学院
主分类号: C12Q1/24 分类号: C12Q1/24;C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/6869
代理公司: 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 代理人: 戴雨君
地址: 362000 福建*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 利用 单宁 粗提物 富集 盐沼 土壤 硝化 功能 微生物 方法
【说明书】:

本发明公开了利用单宁粗提物富集盐沼土壤反硝化功能微生物的方法,所述方法是将大红树叶片粗浓缩单宁溶液添加到盐沼土壤中进行微宇宙模拟培养。本发明方法显著地促进了土壤中的反硝化功能微生物的富集作用,本发明方法可以通过高通量测序技术结合PICRUSt2功能预测分析,提高反硝化功能微生物的筛选效率和缩短其培养时间。

技术领域

本发明属于微生物技术领域,具体涉及一种利用大红树叶片单宁粗提物富集盐沼土壤反硝化功能微生物的方法。

背景技术

反硝化作用是土壤氮素循环的重要途径,其过程主要由土壤中的反硝化功能微生物完成。在滨海湿地和盐沼土壤生态系统中,反硝化功能微生物的存在能有效地消除滨海生态系统中存在的过量氮素造成的富营养化等问题,从而减轻氮素污染对近海生态系统平衡的破坏。通过模拟盐沼土壤的野外生境的条件下,寻找一种快速高效的反硝化功能微生物的富集方法,可以为降低近海生态系统的氮素污染或减轻近海水产养殖环境的富营养化问题提供科学依据。

现有关于反硝化功能菌的筛选与培养的应用已有报道。例如申请号为CN201510077694.3的专利文件“一种异养硝化好氧反硝化细菌的驯化与筛选方法”;申请号为CN202010738645.0的专利申请“一种应用于治理水产养殖尾水的异养硝化-好氧反硝化细菌的筛选及脱氮性能评估方法”。对于申请号为CN201510077694.3的专利文件,该方法通过摇瓶和污泥样品富集脱氮菌,再依次应用SBR反应器和低溶解氧A/O工艺驯化、分离筛选异养硝化好氧反硝化细菌。对于申请号为CN202010738645.0的专利申请,该方法首先通过贫营养培养基逐步驯化养殖水体细菌,再采用梯度稀释和平板划线法分离和纯化细菌,最后再以唯一氮源的贫营养培养基对获得的细菌菌株中的异养硝化好氧反硝化细菌进行筛选。在这两种方法中,均是在富集污泥或水体中氮相关细菌的基础上,再分别利用多步驯化和分离的方法筛选获得异养硝化好氧反硝化细菌,具有以下缺点:1、整个驯化工艺程序和步骤较为繁琐,需要大量的辅助材料才能完成异养硝化好氧反硝化细菌的分离筛选,多步驯化和分离程序中还可能伴随着较大的实验误差;2、筛选获得目标菌是否为异养硝化好氧反硝化细菌,还需利用分子生物学方法加以鉴定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用大红树叶片单宁粗提物富集盐沼土壤反硝化功能微生物的方法,该方法中,大红树叶片单宁粗提物能够快速,高效的富集盐沼土壤中的反硝化功能微生物。

为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:

利用大红树叶片单宁粗提物富集盐沼土壤反硝化功能微生物的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)采集大红树叶片进行单宁粗提物提取,获得大红树叶片粗浓缩单宁溶液;

2)将大红树叶片粗浓缩单宁溶液添加到盐沼土壤中进行微宇宙模拟培养。

进一步地,步骤1)具体如下:将清洗干净的大红树叶片烘干后磨碎成粉末状,使用体积比为68~70 : 30~32的丙酮-水溶液提取粗单宁物质,将提取物通过带真空泵的布氏漏斗过滤并进行真空旋转浓缩,所得浓缩液用正己烷萃取3次后得到大红树叶片粗浓缩单宁溶液。

进一步地,步骤2)所述微宇宙模拟培养如下:将盐沼土壤过2 mm筛后加入培养瓶中,按照10~11 mg单宁/克干土的比例加入粗浓缩单宁溶液,然后保持80~82%的土壤含水量,在25 ℃、黑暗条件培养至少42天。培养过程中测量盐沼土壤水分含量,当盐沼土壤含水量低于80%时,通过添加无菌去离子水来调节水份含量。

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