[发明专利]酶标记物的制备方法

说明书

本申请公开了一种酶标记物的制备方法。具体而言，本申请涉及一种丙戊酸衍生物及其制备方法，以及与含有上述丙戊酸衍生物的试剂盒及其配制方法。本申请的技术方案使用了一种新型的丙戊酸衍生物，并使用了选择性较高的马来酰亚胺‑巯基的偶联方法，使衍生物和酶进行1：1偶联，大大降低了常规偶联过程所形成的批间差。本申请的丙戊酸检测试剂盒简便、快捷、成本低，可以在多种主流机型上进行自动化检测。

本申请是2019年10月30日提交的申请号为201911042028.0的中国专利申请《丙戊酸衍生物及其在免疫检测中的用途》的分案申请。

技术领域

本申请涉及一种丙戊酸衍生物及其制备方法、一种丙戊酸均相酶免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

丙戊酸(Valproic acid)结构式如下所示：

丙戊酸是治疗癫痫的药物。药物成分为丙戊酸钠和丙戊酸，既可作为单药治疗，也可作为添加治疗。丙戊酸用于治疗全身性癫痫：包括失神发作、肌阵挛发作、强直阵挛发作等。治疗部分性癫痫适用于：简单部分性发作、复杂部分性发作、部分继发全身性发作。除用于抗癫痫外，还可用于治疗热性惊厥、运动障碍、舞蹈症、卟啉症、精神分裂症、带状疱疹引发的疼痛、肾上腺功能紊乱，以及预防酒精戒断综合征。

丙戊酸疗法的常见不良反应表现为：消化道症状、月经周期改变；较少见脱发、便秘、倦睡、眩晕、疲乏、头痛、共济失调、轻微震颤、异常兴奋、不安和烦躁；长期服用时，偶见胰腺炎、肝损伤、急性肝坏死、血小板减少；偶有过敏；偶有听力下降和可逆性听力损坏。

因此，在治疗过程中需要对该药不良反应监测予以重视。由于药物代谢个体存在差异，临床使用时应结合血药浓度监测，制定合理的给药方案，尽量避免不良反应发生。

目前临床上监测丙戊酸血药浓度有多种方法，如高效液相色谱分析(HPLC)、化学发光法、均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法等。HPLC费时且不易自动化；直接化学发光法灵敏度高，但是需要昂贵的化学发光仪器，操作繁琐，检测时间长，自动化程度低，重复性较差。现有的均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法也因重复性差、线性差，应用受到一定限制。

专利申请CN102507917A公开了一种丙戊酸酶标偶联物，先通过向丙戊酸衍生物溶液中加入三丁胺和氯甲酸异丁酯活化丙戊酸衍生物；随后与葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)在-2至-8℃条件下进行偶联，利用凝胶层析柱进行纯化，得到丙戊酸酶标偶联物；最后用缓冲溶液稀释丙戊酸酶标偶联物制得。

专利申请CN103242445A公开了一种获取酶标偶联物的制备方法：称取葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在室温条件下溶解于磷酸缓冲液中，终浓度为3-5mg/mL；用二甲基甲酰胺溶解丙戊酸衍生物，通过三丁胺法进行活化，并与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶溶液进行交联反应，经纯化和透析后得到葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-丙戊酸偶联物。

专利申请CN108956971A公开了一种丙戊酸免疫检测试剂及其制备和检测方法，将丙戊酸、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶解于吗啉乙磺酸(MES)溶液中活化后，再与酶偶联。

上述三种路线均依赖于对丙戊酸原本携带的反应基团进行激活，之后再与酶进行反应。这样的策略难以保证定向反应，也难以实现衍生物和酶之间进行1：1偶联，而导致批间差不稳定。最优的情况下，上述策略制得的试剂，所报道的批内和批间精密度CV仅在4.7％左右的水平。

因而，本领域仍需一种改进的丙戊酸衍生物，以及一种改进的偶联方法。

发明内容

根据一些实施方案，提供了一种丙戊酸衍生物，其具有式I所示的结构：

其中

n为1至10的整数，优选2至6的整数；