[发明专利]酶标记物的制备方法

权利要求书

1.一种酶标记物的制备方法，其包括步骤：

1)提供丙戊酸衍生物；优选在非质子性溶剂中提供丙戊酸衍生物；

2)提供葡萄糖六磷酸脱氢酶变体；

3)在18℃至28℃将所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体接触1小时至4小时，使得所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体发生偶联，得到酶标记物；优选，在18℃至25℃将所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体接触2小时至3小时；

4)任选，对所述酶标记物进行纯化；

步骤1)和2)可互换；

所述非质子性溶剂选自以下一种或组合：乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜；

优选，在步骤3)之前，所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体包含至少一个游离的巯基，

步骤3)中，所述丙戊酸衍生物和所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体接触的摩尔比范围为1：1至1：200；优选1：50；

优选地，所述丙戊酸衍生物在所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体第254位氨基酸残基处共价结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

相较于肠系膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides的野生型葡萄糖六磷酸脱氢酶，所述葡萄糖六磷酸脱氢酶变体的第254位脯氨酸残基取代为半胱氨酸残基。

3.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述丙戊酸衍生物是式I所示的结构：

其中

n为1至10的整数，优选2至6的整数；

m为1至10的整数，优选1至5的整数；

优选，所述丙戊酸衍生物是式II所示的结构：

4.一种酶标记物，其是权利要求1-3中任一项所述方法制备所得。

5.一种试剂，其包含权利要求4所述的酶标记物。