[发明专利]一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法

说明书

本发明公开了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。本发明产paraherquamide A的青霉菌，其特征在于，命名为青霉(Penicillium sp.)，株号KWF31，保藏号CCTCC NO.M 20221625。本发明筛选获得了一株能够产paraherquamide A的青霉菌株，并且本发明经过培养条件优化，使得生物发酵培养时paraherquamide A的产量得到了提高，最高比初始产量(42mg/L)提高了约6倍。并进一步优化了分离纯化的方法，能够获得较为纯净的产物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。

背景技术

是由动物保健药和疫苗公司硕腾Zoetis开发的一种新型的绵羊口服短效杀虫药，该药的药效成分是得曲恩特(Derquantel，10mg/mL)和阿维菌素(1mg/mL)。可杀死对含左旋咪唑、苯并咪唑、大环内酯和三氯苯咪唑等杀虫剂形成抵抗力的蠕虫，如捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)、环纹背带线虫(Teladorsagiacircumcincta)、蛇形毛圆线虫(Trichostrongylus colubriformis)等。标准剂量为1mL/5kg(药液体积/绵羊体重)，成年绵羊按50kg计算相当于每只绵羊用药一次需要0.5g得曲恩特。根据世界粮农组织的统计数据，世界绵羊存栏量超过10亿只。因此，保守估计得曲恩特的潜在需求量为百吨级甚至更高，市场需求巨大。

得曲恩特是真菌代谢产物paraherquamide A(简称PHQ A，CAS号77392-58-6，化学式如式Ⅰ所示)的化学衍生物，可由paraherquamide A经酰胺羰基还原、脱氧而获得(Mauragis Micheal A,Lipton Micheal F,Veley Micheal F.Process Development andPreparation of 2-Deoxyparaherquamide:Implementation of a Selective Reductionof Secondary Amides on a Kilogram Scale.Organic Process ResearchDevelopment,2002,6,192-196.)，是目前工业生产得曲恩特的工艺路线。该化学反应得率达到75％以上，因此得曲恩特的工业原料供应主要是受paraherquamide A产量影响。而paraherquamide类天然产物产物化学结构复杂，虽然已有利用工业原料异戊二烯或异戊二烯环氧化物化学全合成paraherquamide A的方法，但其化学反应步骤多达46步(Williams Robert M,CaoJianhua,Tsujishima H,et al.Asymmetric,stereocontrolled total synthesis ofparaherquamide A.Journal of American Chemistry Society,2003,125,12172-12178)，收率极低，不适用于工业生产。利用微生物发酵生产paraherquamide A是目前大规模获得该化合物的唯一途径。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。

本发明首先提供了一种产paraherquamide A的青霉菌，命名为青霉(Penicilliumsp.)，株号KWF31，保藏号CCTCC NO.M 20221625。

本发明又提供了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法，包括以下步骤：在培养基中接种权利要求1所述青霉菌并进行发酵培养，发酵培养完成后分离纯化获得化合物paraherquamide A，

其中，培养基中碳源为蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉中的至少一种；

氮源为蛋白胨、黄豆饼粉、酵母粉和硝酸盐中的至少一种；