[发明专利]一种白背飞虱Ago1基因、合成dsRNA的方法及其应用

说明书

本发明是一种一种白背飞虱Ago1基因、合成dsRNA的方法及其在RNAi介导的害虫防治方面的应用，该白背飞虱Ago1基因采用RNA干扰技术制备，注射白背飞虱Ago1基因dsRNA至4龄若虫后出现较高致死现象，因此，Ago1基因在害虫防治中可作为一个新颖的防治靶标。

技术领域

本发明涉及微生物技术的领域，特别涉及一种白背飞虱Ago1基因、合成 dsRNA的方法及其在RNAi介导的害虫防治方面的应用。

背景技术

白背飞虱Sogatalla furcifera(Horváth)属于半翅目Hemiptera飞虱科Delphacidae，是水稻生产中危害严重的害虫之一，其主要以若虫和成虫刺吸水稻茎秆汁液，造成养分流失；同时还传播南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streakeddwarf virus,SRBSDV)等病毒。作为一种迁飞性害虫，在适宜环境条件时，白背飞虱易爆发，给水稻生产带来严重经济损失。白背飞虱的防治目前仍主要依赖于化学农药，然而，长期不合理和过度的使用化学农药导致白背飞虱产生抗药性，杀伤天敌和污染环境。因此，研究并开发环境友好型的新型杀虫剂对白背飞虱的防控工作具有重大意义。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由小分子dsRNA引起目的基因 mRNA序列特异性降解，导致靶标基因沉默或表达量下调的现象。RNAi已成为研究昆虫基因功能的一个重要工具，且该技术在植保领域已成为新的害虫防治手段：其利用昆虫体内基因片段，通过RNAi抑制害虫生长发育至关重要的基因的转录水平，以达到防治害虫的目的。因此，应用RNAi技术开发新型杀虫剂对于害虫防治具有重要意义。

昆虫RNAi通路中的蛋白主要有Drosha蛋白、Dicer蛋白、Argonaute蛋白以及dsRNA结合结构域蛋白(double-stranded RNA binding domain protein)，其中Argonaute蛋白作为RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencingcomplex, RISC)的核心元件。Ago蛋白亚类的两个成员分别为Ago1和Ago2，其中Agol 包含DUF1785结构域、PAZ结构域和PIWI结构域。Ago1作为昆虫体内miRNA 通路的重要组分，其能特异性地招募miRNA从而参与mRNA的沉默，从而调控基因表达。

通过干扰Ago1基因探究miRNA在昆虫生长发育、生殖、抗性、免疫等方面的功能研究表明该基因与昆虫各种生长发育过程密切相关。但是目前针对白背飞虱Ago1基因的研究未见相关报道，也未见针对白背飞虱Ago1基因其在 RNAi介导害虫防治的报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明的首要目的是提供一种白背飞虱Ago1基因、合成dsRNA的方法及其在RNAi介导的害虫防治方面的应用，该白背飞虱Ago1 基因采用RNA干扰技术制备，注射白背飞虱Ago1基因dsRNA至4龄若虫后出现较高致死现象，因此，Ago1基因在害虫防治中可作为一个新颖的防治靶标。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种白背飞虱Ago1基因，包括SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列、SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列及SEQ ID NO：3所示的靶标基因序列。

所述SEQ ID NO：1为：