[发明专利]一种基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202211341680.4 | 申请日： | 2022-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN115948613A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 王孟强;张璐;胡景杰;包振民;王燕;刘可欣;邵烁如 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学三亚海洋研究院;中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 王美燕 |
| 地址： | 572024 海南省三亚市崖州区*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 era 技术 白斑 综合症 病毒 快速 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)ERA特异性引物和探针设计：
上游引物:5’-ACAACACTGTGACCAAGACCATCGAAACCC-3’
下游引物:5’-TCCGCATCTTCTTCCTTCATCTGTGCATCA-3’
探针:依序包括TTGGATCAGGCTACTTCAAGATGACTGATGTGT，THF，CTTGACAGCGACACCTT和C3间臂；
(2)提取待测样品DNA；
(3)以待测样品的DNA为模板，采用步骤一设计的引物和探针进行ERA反应，得到ERA扩增产物并检测荧光信号强度。
2.根据权利要求1所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，步骤(3)中，ERA检测程序为：32℃-45℃反应30min。
3.根据权利要求1所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，步骤(3)中，ERA检测程序为42℃反应30min。
4.根据权利要求1所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，ERA检测结果判定方法为：
若ERA扩增产物满足如下条件：在ERA扩增的20min内扩增曲线的荧光值出现拐点，则表明扩增结果为阳性，即待测病毒为白斑综合症病毒；
若ERA扩增产物不满足上述条件：则表明扩增结果显示为阴性，即待测病毒不为白斑综合症病毒。
5.根据权利要求1所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，在THF左右分别加入一个荧光基团和一个猝灭基团。
6.根据权利要求1所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，检测的靶基因为VP28基因。
7.根据权利要求5所述的基于ERA技术的白斑综合症病毒快速检测方法，其特征在于，荧光基团和猝灭基团分别为FAM和BHQ1。
8.一种用于白斑综合症病毒快速检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的上游引物、下游引物和探针。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括溶解剂、激活剂和荧光扩增试剂。
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