[发明专利]一种肠道微生物基因组DNA低渗保护剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种肠道微生物基因组DNA低渗保护剂，它含有以下组分：0.2％Tween 20、0.1×PBS、100‑200mM硫氰酸胍。所述的肠道微生物基因组DNA低渗保护剂pH值在7.0‑7.4之间。本发明所述的肠道微生物基因组DNA低渗保护剂无需低温冰箱就可以让肠道微生物样本方便安全地保存3周(室温)，低温更可长期保存，并且该试剂没有毒性、使用方便、成本低廉、更易于广泛应用。本发明还提供了所述的肠道微生物基因组DNA低渗保护剂的制备方法和应用。

发明名称：

一种肠道微生物基因组DNA低渗保护剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物化学和分子生物学领域，具体涉及保护人类肠道微生物基因组DNA稳定性的一种化学试剂。

背景技术

人类及动物肠道中存在大量有意义的微生物，这些肠道微生物与宿主的健康存在密切关系，并受到了全球学术及产业界的广泛关注。近年来，已经有许多研究机构和企业致力于肠道菌群与人体疾病的关系研究及肠道健康检测服务。目前，肠道微生物的检测在美国已经广泛开展，国内在这方面虽然刚刚起步，但发展也十分迅速。而进行肠道健康评估及肠道微生物移植供体健康筛查的关键是能够提取到高质量的肠道微生物基因组DNA。由于肠道中存在大量的核酸酶，肠道微生物基因组DNA在室温下非常容易被降解。因此，保持肠道微生物基因组DNA的稳定成为有效提取肠道微生物基因组DNA的重要前提。肠道微生物基因组DNA保护剂可以在样本运输和操作期间有效保护肠道微生物基因组DNA的完整性，对于肠道微生物生态学分析和代谢特征检测也是至关重要的。尤其是对于需要室温邮寄的样本来说，由于运输过程中温度难以控制，会造成严重的DNA降解，而低温与恒温会大幅增加成本，所以更加依赖于经济、有效的肠道微生物基因组DNA保护剂。

甲醛在基因组DNA保护剂中已经广泛使用，甲醛能够使细胞膜稳定，从而减少细胞裂解，此外甲醛还可以抑制核酸酶，从而抑制酶促反应，例如由DNA酶造成的DNA降解。然而，使用甲醛或释放甲醛的物质有明显的缺点：它们可能通过诱导核酸分子之间或蛋白质与核酸之间的交联而降低核酸的分离效率。目前，虽然基因组DNA保护剂的研究和开发已经取得了一定的进展，然而，新的需求仍然持续不断：尤其是在新兴的肠道菌群检测领域，室温保持微生物DNA长期稳定，对提高检测灵敏度与准确性、以及控制运输成本都至关重要。

本发明在上述背景下开发出一种新的肠道微生物基因组DNA低渗保护剂，有效解决人类肠道微生物基因组DNA在室温下降解的问题，实现室温下对肠道微生物基因组DNA长时间保存及进一步提高其稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够使肠道微生物基因组DNA稳定的方法，并且能够克服现有肠道微生物基因组DNA保护剂技术的缺点，尽可能全面的保护样品中全部微生物基因组DNA的稳定，并且实现：1)将这种保护的作用条件适合于室温；2)将保护作用的有效时间延长至三周。从而确保样本适合于日常的运输条件(如邮寄)。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：