[发明专利]疟原虫数字PCR快速检测体系及检测方法

说明书

本申请涉及疟原虫的多重数字PCR快速检测体系及检测方法，可以高灵敏的检出血液中疟原虫的种类和密度，尤其在应用于无症状感染者和低密度水平分析时优势突出，对预防疟原虫感染的漏检、误检效果显著。同时在疟疾伴随诊断中，还可以配合治疗策略的有效调整，更加有效管控药物的使用，加强耐药控制，降低病人的耐药风险。

技术领域

本发明涉及疟原虫的多重数字PCR快速检测体系及检测方法。

背景技术

疟疾与艾滋病、结核是世界公认的危害人类生命健康的三大公共问题之一，是由疟原虫引起并经按蚊传播的一种寄生虫病。世界卫生组织(WHO)指出2017年全世界有2.19亿疟疾新病例和43.5万例死亡病例。现在全球疟疾的发病主要流行于非洲、亚洲和拉丁美洲的热带和亚热带地区，以非洲的疟疾疫情最为严重。疟原虫进入人体后在肝脏中繁殖，继而感染并破坏血红细胞，不断繁殖、不断破坏，导致人体发病。症状主要表现为周期性规律发作，全身发冷、发热、多汗，长期多次发作后，可引起贫血和脾肿大。凶险型疟疾可出现因脑、肝、肾、心、肺、胃、肠等受损引起的各种综合征，病情严重者会出现谵妄、昏迷和休克等症状，如诊断不及时或治疗不当，可危及生命。疟疾的早期快速诊断有助于及时治疗感染病例，降低死亡率，同时还可用于对献血者的血液筛查分析。寻找快速、简单、高敏感性和高特异性的疟疾检测方法，成为当前疟疾诊断研究的一个重要方面。

发明内容

本发明的目的在于提供高效筛查疟原虫的PCR引物对、探针、微流控卡盒、试剂盒、检测体系和检测方法，所述PCR引物对、探针、微流控卡盒、试剂盒、检测体系和检测方法可用于任意PCR检测体系，包括但不限于常规PCR、RL-PCR、RNA-PCR、荧光定量PCR、数字PCR、PCR-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)，巢式PCR-高分辨率熔解分析(nPCR-HRM)等，优选用于数字PCR。

为达到以上目的，本发明采用如下技术方案：

项1.一组用于特异性扩增疟原虫基因的PCR引物，其特征在于，所述引物包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、和如SEQ ID NO:2所示的反向引物。

项2.一组用于特异性筛查三日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:3所示的探针。

项3.一组用于特异性筛查卵形疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5所示的探针。

项4.一组用于特异性筛查恶性疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:6所示的探针。

项5.一组用于特异性筛查间日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:7所示的探针。

项6.一种基于PCR方法筛查或辅助筛查疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:7所示的探针中的任意一条、任意两条、任意三条、任意四条、或五条。

项7.根据项2-6中任一项所述的引物和探针组合，其特征在于，所述探针序列的5’端标记有荧光报告基团，所述探针序列的3’端标记有荧光淬灭基团；当所述探针位于同一反应体系时，其中筛选不同种类疟原虫的荧光报告基团光谱范围不同。