[发明专利]疟原虫数字PCR快速检测体系及检测方法

权利要求书

1.一组用于特异性扩增疟原虫基因的PCR引物，其特征在于，所述引物包含如SEQ IDNO:1所示的正向引物、和如SEQ ID NO:2所示的反向引物。

2.一组用于特异性筛查三日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ IDNO:3所示的探针。

3.一组用于特异性筛查卵形疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ IDNO:4和/或SEQ ID NO:5所示的探针。

4.一组用于特异性筛查恶性疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ IDNO:6所示的探针。

5.一组用于特异性筛查间日疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ IDNO:7所示的探针。

6.一种基于PCR方法筛查或辅助筛查疟原虫的引物和探针组合，其特征在于，所述引物对包含如SEQ ID NO:1所示的正向引物、如SEQ ID NO:2所示的反向引物，所述探针包含如SEQ ID NO:3至SEQ ID NO:7所示的探针中的任意一条、任意两条、任意三条、任意四条、或五条。

7.根据权利要求2-6中任一项权利要求所述的引物和探针组合，其特征在于，所述探针序列的5’端标记有荧光报告基团，所述探针序列的3’端标记有荧光淬灭基团；当所述探针位于同一反应体系时，其中筛选不同种类疟原虫的荧光报告基团光谱范围不同。

8.根据权利要求7所述的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、Cy5和/或HEX；所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、和/或Eclipse。

9.根据权利要求8所述的引物和探针组合，其特征在于：其中使用的各探针及其5’端标记的荧光报告基团和3’端标记的荧光淬灭基团如下：

筛选三日疟原虫的探针如SEQ ID NO:3所示，其5’端荧光标记为FAM，3’端荧光标记为BHQ1；筛选卵形疟原虫W亚型的探针如SEQ ID NO:4所示，其5’端荧光标记为VIC，3’端荧光标记为BHQ1；筛选卵形疟原虫C亚型的探针如SEQ ID NO:5所示，其5’端荧光标记为VIC，3’端荧光标记为BHQ1；筛选恶性疟原虫的探针如SEQ ID NO:6所示，其5’端荧光标记为ROX，3’端荧光标记为BHQ2；筛选间日疟原虫的探针如SEQ ID NO:7所示，其5’端荧光标记为Cy5，3’端荧光标记为BHQ3。

10.如权利要求6-9任一项权利要求所述的引物和探针组合，其为数字PCR(dPCR)反应所用的引物和探针组合。

11.一种筛查疟原虫的数字PCR反应预混液，其特征在于，所述数字PCR反应预混液包含如权利要求1-9任一项所述的引物和/或探针。

12.根据权利要求11所述的数字PCR反应预混液，其还包括选自以下的一种、两种、三种、四种或五种组分：热启动Taq酶、UDG酶、dNTPs，牛血清白蛋白和Mg²⁺离子。

13.一种数字PCR微流控卡盒，其含有权利要求11或权利要求12所述的数字PCR反应预混液。