[发明专利]一种用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组及方法

权利要求书

1.一种用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组，其特征在于，所述引物组包括半定量PCR扩增引物组和荧光定量PCR扩增引物组；

所述半定量PCR扩增引物组由2对引物组成，分别为nanos1 F、nanos1R、β-actin F、β-actin R，所述nanos1 F、nanos1 R、β-actin F、β-actin R的核苷酸序列如SED ID NO.1～4所示；

所述荧光定量PCR扩增引物组由2对引物组成，分别为nanos1 QF、nanos1 QR、β-actinQF、β-actin QR，所述nanos1 QF、nanos1 QR、β-actin QF、β-actin QR的核苷酸序列如SEDID NO.5～8所示；

所述nanos1 F、nanos1 R还用于罗氏沼虾nanos1基因的PCR扩增和原位杂交。

2.一种权利要求1所述用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)测序获得罗氏沼虾转录组数据，筛选出nanos1基因的预测序列；

(2)随机选择罗氏沼虾健康个体的性腺，提取总RNA，逆转录后获得cDNA，验证筛选出的罗氏沼虾nanos1基因；

(3)半定量PCR扩增引物组的设计：根据步骤(2)所得的nanos1基因，设计上下游特异引物及β-actin内参引物，得到罗氏沼虾nanos1基因的半定量PCR扩增引物组；

(4)荧光定量PCR扩增引物组的设计：根据步骤(2)所得的nanos1基因，进行荧光定量PCR扩增引物组的设计，得到罗氏沼虾荧光定量PCR扩增引物组。

3.一种用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组。

4.根据权利要求3所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，所述基因分析的方法包括半定量PCR、荧光定量PCR、PCR和原位杂交。

5.根据权利要求4所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，所述PCR用于对罗氏沼虾nanos1基因进行扩增；所述PCR扩增以罗氏沼虾的性腺cDNA为模板；

所述PCR扩增的反应条件为：94℃ 2min；94℃ 30s，57℃ 30s，72℃ 90s38个循环；72℃10min。

6.根据权利要求4所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，所述半定量PCR用于鉴评nanos1基因在罗氏沼虾不同组织中的表达；所述半定量PCR以罗氏沼虾不同组织的cDNA为模板；

所述半定量PCR扩增的反应条件为：94℃ 2min；94℃ 30s，57℃ 30s，72℃ 40s 38个循环；72℃ 10min；

所述不同组织包括罗氏沼虾的脑、肝胰腺、心脏、肌肉、性腺、鳃、肠、眼。

7.根据权利要求4所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR用于鉴评nanos1基因在罗氏沼虾早期发育时期的表达；

所述荧光定量PCR以罗氏沼虾卵、胚胎和早期发育时期的cDNA为模板；所述卵包括未受精卵、受精卵、卵裂期；所述胚胎包括囊胚期、原肠胚期；所述早期发育时期包括溞状幼体期、幼体期；

所述荧光定量PCR扩增的反应条件为：50℃ 2min，95℃ 2min；95℃ 15s，60℃ 30s，72℃ 30s，40个循环；溶解曲线检测：95℃ 15s，60℃ 30s，95℃ 15s。

8.根据权利要求4所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的方法，其特征在于，所述原位杂交用于鉴评nanos1基因在罗氏沼虾性腺组织中的表达位置；所述原位杂交为对罗氏沼虾的性腺组织进行原位杂交。

9.一种权利要求1所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组在调控罗氏沼虾雌性生殖细胞发育中的应用。

10.一种权利要求1所述的用于罗氏沼虾nanos1基因分析的引物组在罗氏沼虾早期发育时期的性别鉴定中的应用。