[发明专利]烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测引物、检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测引物，其特征在于，RT-LAMP检测引物为CH-CP-3或CH-CP-4；其中

上表中外引物为CH-CP-F3-n、CH-CP-B3-n；

内引物为CH-CP-FIP-n、 CH-CP-BIP-n；

环引物为CH-CP-LF-n、 CH-CP-LB-n；其中n=3或4。

2.根据权利要求1所述的RT-LAMP检测引物，其特征在于，烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测引物为CH-CP-3。

3.根据权利要求1所述的RT-LAMP检测引物，其特征在于，烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测引物为CH-CP-3时，RT-LAMP检测灵敏度为原RNA浓度的10^-7。

4.一种烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测方法，其特征在于，以待测样品的RNA为模板，采用如权利要求1~3中任一项所述的RT-LAMP引物进行RT-LAMP扩增反应；反应结束后观察RT-LAMP扩增反应溶液颜色变化，若反应液显绿色，则判断待测样品感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阳性结果；若反应液显橙黄色，则判断待测样品未感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阴性结果；

优选地，将RT-LAMP扩增反应溶液置于紫外灯下，若反应液发出白色荧光，则判断待测样品感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阳性结果；若反应液不发出白色荧光，则判断待测样品未感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阴性结果。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，RT-LAMP扩增反应温度为59~69℃；

更优选地，RT-LAMP扩增反应温度为63℃。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，RT-LAMP扩增反应时间为30~80min；

更优选地，RT-LAMP扩增反应时间为50~60min；

更优选地，RT-LAMP扩增反应时间为50min。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，RT-LAMP扩增反应体系中甜菜碱溶液浓度为0~1.6mmol/μl；

更优选地，RT-LAMP扩增反应中甜菜碱溶液浓度为1.0~1.4mmol/μl；

更优选地，RT-LAMP扩增反应中甜菜碱溶液浓度为1.0mmol/μl。

8.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，RT-LAMP扩增反应体系中dNTPs溶液浓度为0~2.2mmol/μl；

更优选地，RT-LAMP扩增反应体系中dNTPs溶液浓度为0.2mmol/μl。

9.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，RT-LAMP扩增反应体系中Mg²⁺溶液浓度为2~8mmol/μl；

更优选地，RT-LAMP扩增反应中Mg²⁺溶液浓度为4mmol/μl；

优选地，RT-LAMP扩增反应体系中内外引物浓度比为1:1~8:1；

更优选地，RT-LAMP扩增反应体系中内外引物浓度比为4:1。

10.一种烟草易感南美红辣椒脉斑驳病毒的RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括如上述的引物，检测试剂盒内以待测样品的RNA为模板，利用所述引物进行RT-LAMP扩增反应；反应结束后观察RT-LAMP扩增反应溶液颜色变化，若反应液显绿色，则判断待测样品感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阳性结果；若反应液显橙黄色，则判断待测样品未感染南美红辣椒脉斑驳病毒为阴性结果；

该试剂盒中RT-LAMP扩增反应参数按权利要求4~9中任一项选取。