[发明专利]一种具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白及其制备方法和应用，其中，所述LPTS蛋白抑制端粒酶活性的活性片段包括LPTS132‑280、LPTS132‑286、LPTS132‑289、LPTS132‑294、LPTS132‑299、LPTS132‑314、LPTS132‑319、LPTS158‑328、LPTS254‑328、LPTS280‑328、LPTS290‑328、LPTS294‑328或LPTS298‑328，通过对不同截断体融合蛋白在体外抑制端粒酶活性的能力对比，发现LPTS158‑328(LPB)具有最强的抑制肿瘤细胞生长的作用。

技术领域

本发明涉及一种具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白及其制备方法和应用，属于生物技术和分子生物学研究领域。

背景技术

端粒(Telomere)是真核细胞线性染色体末端由一简单串联重复排列的DNA序列及相关蛋白质组成，具有稳定染色体的作用。研究表明在正常人体细胞内端粒酶活性几乎检测不到，因此，人正常体细胞分裂次数是有限的，细胞每分裂一次，端粒便丢失50-200bp，由于末端复制问题的存在，当端粒缩短到一定程度时细胞生长受到抑制，细胞逐渐进入衰老期和危机期，即称为细胞衰老，并走向死亡。但是，极少数细胞，如癌细胞，能通过稳定其端粒的长度而逃离危机期。在绝大多数恶性肿瘤细胞(85％)中普遍可以检测到端粒酶活性且活性较强，端粒酶对端粒的重新合成补偿了它在细胞繁殖过程中的持续丢失，从而使得细胞可以不断的分裂，这是细胞永生化和癌变的一个重要机制。端粒的合成主要是由端粒酶来完成的。端粒酶(Telomerase)是一种合成和延伸细胞染色体端粒的核糖核蛋白，它包含两种基本成分：逆转录酶催化亚基hTERT和RNA组分hTR。人端粒酶的逆转录酶催化亚基(hTERT)能以自身RNA(hTR)为模板，反转录合成端粒重复列，加到染色体的末端，弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失，维持端粒的长度。从而使得细胞获得永生化能力，这也是细胞发生癌变的必要分子基础。

Kim等分析总结了大量研究结果，检测了100多种恶性肿瘤标本，指出端粒酶诊断肿瘤的敏感性为85％，特异性为91％，阳性预测值为91％，阴性预测值为81％，充分表明端粒酶在肿瘤诊断中的价值(Kim NW,Piatyszek MA,Prowse KR,et al.Specificassociation of human telomerase activity with immortal cells andcancer.Science.1994 Dec 23；266(5193):2011-5.)。端粒酶被激活是发生恶性肿瘤的主要因素之一，其激活及表达程度与肿瘤的发生和转移密切相关，抑制端粒酶并使端粒缩短被认为是抑制癌细胞的一种机制，因此端粒酶成为肿瘤靶向治疗的理想靶点。多种靶向端粒酶的小分子抑制剂和端粒酶疫苗已经进入临床试验，如Imetelstat已经进入了临床III期试验。