[发明专利]一种具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有高效端粒酶抑制活性的活性片段，其特征在于，所述LPTS蛋白抑制端粒酶活性的活性片段包括LPTS132-280、LPTS132-286、LPTS132-289、LPTS132-294、LPTS132-299、LPTS132-314、LPTS132-319、LPTS158-328、LPTS254-328、LPTS280-328、LPTS290-328、LPTS294-328或LPTS298-328片段。

2.根据权利要求1所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段，其特征在于，所述截断片段为LPTS158-328的DNA序列如SEQ ID NO：33所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：34所示。

3.根据权利要求1所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段，其特征在于，所述LPTS158-328的扩增引物LPB-F和LPB-R的序列如序列表SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示。

4.根据权利要求1所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段，其特征在于，扩增所述LPTS蛋白抑制端粒酶活性的活性片段LPTS132-280、LPTS132-286、LPTS132-289、LPTS132-294、LPTS132-299、LPTS132-314、LPTS132-319、LPTS254-328、LPTS280-328、LPTS290-328、LPTS294-328及LPTS298-328的引物序列分别如序列表SEQ ID NO：7～20和SEQ ID NO：23～32所示。

5.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白T-LPB含有活性片段LPB158-328。

6.根据权利要求1～3任一项所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S-1.构建pT-LPTS质粒，设计特异性引物反转录PCR扩增获得LPTS全长cDNA片段；

S-2.以S-1获得的LPTS全长cDNA为模板、LPB-F、LPB-R为引物，通过突变PCR反应，获得活性片段LPB。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述反转录的特异性引物序列如SEQID NO：3和SEQ ID NO：4所示。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述S-2步骤具体如下：

s2-1：将上述反转录PCR产物插入pMD-18T载体获得pT-LPTS质粒；

s2-2：以pT-LPTS质粒为模板，设计特异性引物进行PCR反应，反应产物经过EcoR I和Xho I双酶切后，插入经过EcoR I和Xho I双酶切的pGEX-4T-1质粒pGEX-LPTS132-328，转化宿主菌E.coli BL-21，获得表达GST-LPTS132-328的工程菌；

s2-3：根据不同截断体长度设计特异性PCR引物，以pGEX-LPTS132-328质粒为模板，通过突变PCR反应，获得含有LPTS多种不同截断体基因序列的pGEX质粒，转化表达后获得不同截断体融合蛋白。

9.一种根据权利要求1～4任一项所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白的应用，其特征在于，所述活性片段或融合蛋白可用于抑制肿瘤细胞生长。

10.一种根据权利要求1～4任一项所述的具有高效端粒酶抑制活性的活性片段、融合蛋白的组合物，其特征在于，所述组合物含有：

(i)有效量的权利要求1-4任一所述的融合蛋白；和

(ii)(ii)药学上可接受的载体。