[发明专利]一种产卵孢素球孢白僵菌菌株及其在CZB中合成卵孢素的应用

权利要求书

1.一种产卵孢素球孢白僵菌菌株，其特征在于，为ΔBbbgli1-ops3^OE菌株，该菌株由超表达ops3基因后，再敲除Bbbgli1基因得到的。

2.根据权利要求1所述产卵孢素球孢白僵菌菌株，其特征在于，所述ΔBbbgli1-ops3^OE菌株采用如下方法获得：

1）以球孢白僵菌基因组作模板扩增得到ops3基因，并将其克隆进pk2-bar载体的组成型启动子PgpdA下，得pk2-bar-ops3；

2）将pk2-bar-ops3转入根癌农杆菌LBA4404后，利用根癌农杆菌介导球孢白僵菌的遗传转化，并经PCR筛选获得超量表达ops3的ops3^OE菌株；

3）以球孢白僵菌基因组作模板扩增得到Bbbgli1基因的左臂Bbbgli1L和右臂Bbbgli1R，分别构建进pk2-sur载体，得敲除载体pk2-sur- Bbbgli1L-bar- Bbbgli1R；

4）将pk2-sur- Bbbgli1L-bar- Bbbgli1R转入根癌农杆菌LBA4404后，利用根癌农杆菌介导法将pk2-sur- Bbbgli1L-bar- Bbbgli1R转入ops3^OE菌株，并经PCR筛选获得DBbbgli1-ops3^OE菌株。

3.如权利要求1或2所述产卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的应用，其特征在于，用于在CZB培养基中大量合成卵孢素。

4.一种采用权利要求1或2所述产卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的方法，其特征在于，具体步骤包括：

1）将ΔBbbgli1-ops3^OE表达菌株接种到CZB培养基中于26 ℃摇床上培养5 d；

2）离心后将上清液用等体积的乙酸乙酯进行萃取，过夜；

3）收集乙酸乙酯相和水相，分别经旋转蒸发仪蒸干后，用100%甲醇溶解后离心，得到的上清液即为卵孢素。