[发明专利]一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法

权利要求书

1.一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法，包括冷却机(1)，其特征在于：方法包括以下过程：

S1，组织预处理与固定：

利用昆虫解剖针将蛹壳剥离，注意在解剖时不要用解剖针用力的拨动蛹体，蛹体比较脆弱，极易破坏内部组织，解剖完的虫体放入75％的酒精中清洗，然后将虫体浸于组织固定液中4℃过夜，固定时间不少于12h，本要求的组织固定液为：0.5％多聚甲醛混合固定液；

S2，组织脱水：

取组织固定后的虫体，室温下通过不同梯度的乙醇溶液进行脱水，浓度梯度依次为70％、80％、90％、95％、100％、100％、100％，每个梯度处理时间至少为1h；

S3，组织透明：

取组织脱水后的虫体，室温下在组织透明剂中浸泡；透明剂分别为二甲苯与乙醇体积比为1:2、1:1、2:1的混合液，室温下透明时间分别为30min，最后在100％的二甲苯溶液中透明1h；

S4，组织浸蜡：

65℃下提前将石蜡融化，组织透明后的虫体在石蜡一液体中浸泡4h，然后将虫体放在石蜡二液体中浸泡4h；

S5，组织包埋：

将包埋盒底部浸入一层底蜡，将浸蜡后的虫体置于底蜡中，根据研究内容确定虫体摆放方向，然后浸满石蜡，将包含虫体的整个包埋盒置于冷却机(1)上加速冷却，待完全冷却后，准备用于切片；

S6，切片与展片：

将干净的载玻片提前放在包埋机上预热，包埋机温度设定为40℃，毛笔蘸取切下的薄片置于蒸馏水中，然后拿载玻片吸附水上的切片，切片会自然完全粘附在载玻片上，置于37℃条件下烘片12h以上进行粘片；

S7，组织脱蜡：

将干燥好的载玻片浸泡在100％二甲苯溶液一、100％二甲苯溶液二中，时间分别为5min，然后依次转移到100％、100％、90％、80％、70％乙醇溶液中浸泡6-8min，最后在蒸馏水中处理5min；

S8，组织染色：

取组织脱蜡后的载玻片浸泡在苏木精溶液中，保持10min，蒸馏水一中冲洗40s，蒸馏水二中冲洗30s，随后转移到1％盐酸乙醇溶液中，分色30s，蒸馏水中冲洗1min，随后转移到碳酸锂饱和溶液中，蓝化5min，蒸馏水中冲洗1min，随后转移到伊红溶液中，染色10min，蒸馏水中冲洗3min；

S9，组织脱水与透明：

取染色后的载玻片，依次浸泡在浓度梯度为70％、80％、90％、100％、100％的乙醇溶液中各脱水5min，随后转移到100％的二甲苯溶液一中透明3min，100％的二甲苯溶液二中透明2min；

S10，封片与观察：

将完成的载玻片置于切片盒上，滴加中性树脂盖上盖玻片进行封片，然后室温下进行干燥，显微镜下进行观察。

2.根据权利要求1所述的一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法，其特征在于：所述冷却机(1)包括L形板(2)，所述L形板(2)固定连接于冷却机(1)一侧，所述L形板(2)内部设有杂质清理机构(3)，所述杂质清理机构(3)包括伸缩气缸(301)，所述伸缩气缸(301)固定连接于L形板(2)后侧，所述伸缩气缸(301)内部滑动连接有丝杆(302)，所述丝杆(302)正面固定连接有移动板(303)，所述移动板(303)一侧固定连接有四个固定板(304)，四个所述固定板(304)外侧均固定连接有弧形板(305)和第一弹力带(306)，所述第一弹力带(306)一端固定连接有转动板(307)，所述转动板(307)一侧固定连接有两个固定杆(308)，两个所述固定杆(308)一侧固定连接有磁吸板(309)，所述磁吸板(309)一侧固定连接有清理毛刷(310)。

3.根据权利要求2所述的一种蝇类蛹期石蜡切片制作方法，其特征在于：所述转动板(307)与磁吸板(309)之间固定连接有卡板(311)，所述卡板(311)内部转动连接有转轴，所述转轴顶部外侧固定连接有弧形块(312)，所述转动板(307)一侧固定连接有第二弹力带(313)，所述第二弹力带(313)一端固定连接有活动杆(314)，所述活动杆(314)一侧固定连接有弧形杆(315)，所述弧形杆(315)一端固定连接有转动球(316)，所述转动球(316)外部设有刮板(317)。