[发明专利]蓝点马鲛染色体核型图的制作方法

说明书

本发明涉及蓝点马鲛染色体核型图的制作方法，属于鱼类细胞遗传学领域，所述方法包括：1)获得蓝点马鲛仔稚鱼；2)仔稚鱼染色体制备；3)蓝点马鲛染色体核型分析；本发明采用两种低渗浓度，分别为0.05mol/L KCl和0.075mol/LKCl的低渗溶液，两种低渗浓度的结果综合分析获得染色体核型图，就可以避免染色体丢失和染色体分散不充分的问题，也便于核型分析时染色体着丝点位置的确定。

技术领域

本发明属于鱼类细胞遗传学领域，具体的涉及蓝点马鲛染色体核型图的制作方法。

背景技术

染色体是遗传物质的载体，决定了物种分类地位和系统演化阶段。制备中期分裂相染色体并进行核型分析可有助于了解生物的遗传组成、遗传变异和发育机制，对预测种间杂交和多倍体育种结果、了解性别遗传机理及基因组数、物种起源、进化和种族关系的鉴定都有重要的参考价值，对资源的开发利用和遗传育种有重要的意义。在实际生产中，染色体分析还是各种动物遗传疾病诊断和性状变异研究的一个重要手段，更是染色体组操作育种必需掌握的一门技术。水产养殖业也常常需要掌握所培育物种的染色体组成及结构等信息。对鱼类染色体研究，我国虽然近年来发展很快，但仍主要集中在鲤形目和鲈形目，且大多数仍是淡水鱼类，还有很多重要的海洋经济鱼类染色体组成是未知的。鱼类染色体具有数目多、形态小、分裂指数低的特点，一般制备大量中期分裂相且染色体图像清晰的片子较难，这就给鱼类染色体研究带来了诸多不便，加大了鱼类染色体的研究难度。

1966年，Ojima等(Ojima Y S，Hitotsumachi S,Makino.Cytogentic studies inlower vertebrates.Proc Jap Acad,1966,42(1):62-66)首次采用空气干燥法制片取得成功，目前的染色体制片基本都采用这种方法，但未经改良的这种制备方法很难制得染色体形态清晰且分散较好的片子，不能满足染色体核型分析的要求。要想开展精确的细胞遗传学分析，染色体标本制备和核型分析是很重要的两个个环节。

蓝点马鲛鱼性情急躁，短时挂网会死亡和离水容易死亡，故要获得多尾活的性成熟的亲鱼极其困难。水温和饵料鱼是影响马鲛存活的两大主要因素，海水水温16-25℃时，马鲛鱼追逐鱼群进行摄食活动，当饵料鱼不充足时，受精后第12天的仔稚鱼就会相互残杀。而染色体制备所需对象除了培养细胞外均需活性好的个体以获取足够的分裂细胞。

因此，蓝点马鲛鱼染色体制备需充分考虑其本身的生物学特性，取材和前期处理只能根据实际获取的马鲛鱼状态做调整，以确保蓝点马鲛组织细胞在秋水仙素处理过程中仍保持一定的活力强度，方能制备出足够多的中期分裂相染色体。核型分析也需跟着调整。

染色体制备过程中低渗步骤是为了使组织细胞充分吸胀，在滴片时细胞膜通过摔打和高温双重作用迅速破裂释放出染色体或细胞核。常规的染色体制备低渗液是浓度为0.075mol/L的KCl溶液，但不同物种甚至不同个体的组织细胞渗透压并不完全一致，现有技术一般采用一种浓度的低渗液，染色体制片效果时好时坏，有时甚至无法制备出中期分裂相染色体。有科研人员也考虑到调整低渗溶液浓度来制备中期分类相染色体，但获得结果并不理想。例如，香鱼染色体制备时，在室温下用0.0375mol/L KC1溶液低渗45～60min，其统计的二倍体染色体数目为2n＝42(张春丹，张晓波，李明云.香鱼染色体核型分析，水利渔业，2005,25(4)：16-17，20)，与该物种实际二倍体染色体众数为2n＝56相差甚远。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供蓝点马鲛染色体核型图的制作方法，所述通过对现有海洋动物染色体制备方法的改进，设计适合蓝点马鲛染色体制备和核型分析的方法步骤，以最经济却又最便捷、准确的方法制备出大量的分散较好的中期分裂相染色体，并快速分析出核型。利用本发明方法能快速制备出大量的蓝点马鲛中期分裂相染色体，并制作出准确的核型图。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

蓝点马鲛染色体核型图的制作方法，所述方法包括：1)获得蓝点马鲛仔稚鱼；2)仔稚鱼染色体制备；3)蓝点马鲛染色体核型分析；