[发明专利]他克莫司粗品的提取方法和应用

说明书

本发明公开了一种他克莫司粗品的提取方法和应用，涉及生物医药技术领域。包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后得到的第一固体进行重结晶处理；第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种。通过将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗后重结晶，水萃洗可以除去他克莫司中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，萃洗工艺简便，生产周期短，适宜工业化使用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种他克莫司粗品的提取方法和应用。

背景技术

他克莫司(FK506)是一种新型的二十三元大环内酯类强效免疫抑制剂，具有毒副作用小、死亡率低、移植存活率高、依赖性小等优点，临床广泛应用于多种皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风、Nethenton综合症和抑制宿主病等自身免疫疾病的治疗，以及预防肝脏、肾脏、心脏、肺、胰腺等器官移植术后的排斥反应。

他克莫司来源于发酵产品，从发酵液中制备他克莫司的工艺一般包含从发酵液中提取获得粗品、粗品分离纯化获得他克莫司。因发酵液中他克莫司结构类似物(子囊霉素、二氢他克莫司)占他克莫司的5～10％，子囊霉素及二氢他克莫司因其结构与他克莫司极为相似，无法用常规手段去除，通常只能采用柱层析分离。因此，粗品中杂质含量对柱层析分离效果有较大的影响。

发酵液中除他克莫司及结构类似物外，还含有油脂、蛋白质等副产物，以及无机盐、糖类等物质。由于他克莫司中的杂质含量较多，杂质种类复杂，为了收集到纯度及含量较高的他克莫司，目前从发酵液中提取他克莫司粗品的方法，普遍存在生产效率低下，生产周期长的问题。在一些方案中为了提高生产效率采用纳滤膜、超临界萃取设备等特殊设备，操作较繁琐，生产周期长，不利于工业化；或使用了离子液体等特殊试剂，废液难以处理，对环境不友好。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种他克莫司粗品的提取方法和应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种他克莫司粗品的提取方法，包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体进行重结晶处理；第一极性溶剂的极性小于乙酸丁酯。

在可选的实施方式中，第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种；优选为正己烷。

优选地，第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量。

优选地，水的每次添加量为菌丝体的0.5～1倍重量。

在可选的实施方式中，重结晶包括将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中，再加入第二极性溶剂重结晶。

优选地，第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min。

优选地，第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65℃。

优选地，非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯。

优选地，第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷。

优选地，非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体总重的0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量。

优选地，第二极性溶剂的加入量为非水溶性有机溶剂加入量的0.5～5倍重量，更优选为1～3倍重量。