[发明专利]一种色氨酸代谢限速酶活性的快速评估方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的色氨酸代谢限速酶活性的快速评估方法，其特征在于，具体步骤包括：

S1. 孵育目标细胞；

S2. 采用第一培养基和第二培养基对孵育后的目标细胞进行对照培养；

S3. 配制kynurenine梯度标准液；

S4. 对S2步骤中对照培养后的目标细胞和kynurenine梯度标准液进行显色，检测；

所述第一培养基和第二培养基的区别在于：第一培养基中不含有γ干扰素，第二培养基中含有γ干扰素；

所述第一培养基的原料为MM3培养液，第二培养基的原料为MM3培养液和γ干扰素；所述MM3培养液为血清替代物和基础无血清培养液的混合物；

血清替代物和基础无血清培养液的体积比为1：19；

所述S4步骤具体为，分别取S2步骤对照培养完成的培养液A，培养液B和S3步骤配制的梯度标准液，与有机酸反应，然后和显色剂反应，反应后静置，检测；所述有机酸为浓度为25-35g/100mL的TCA水溶液，所述显色剂为质量浓度为1-3%的PDAB冰醋酸溶液；

所述TCA水溶液的制备步骤为：将TCA溶解于超纯水中，在＞3000r/min条件下涡旋20-150s，避光放置，在20-30min内使用；

和显色剂反应时加入抗氧化剂；所述抗氧化剂为5-15mM的Vc（抗坏血酸）水溶液；

所述S1步骤中孵育目标细胞具体为：使用24孔板，在其中的12孔中每孔加入0.3-0.5mL第一培养基，将目标细胞接种至第一培养基中，孵育22-26h；

所述接种的目标细胞密度为4-6×10⁴个/孔；

所述S2步骤中对照培养具体为，S1步骤完成后，吸弃12孔中的培养基，向其中的6孔加入第一培养基；另外6孔加入第二培养基，对照培养22-26h，得到培养液A和培养液B；其中培养液A为第一培养基的对照培养产物，培养液B为第二培养基的对照培养产物；

所述第二培养基中γ干扰素的质量浓度为5-15 ng/mL；

所述检测具体为：使用酶标仪检测440-495nm的吸光度值。

2.一种根据权利要求1所述的非诊断目的的色氨酸代谢限速酶活性的快速评估方法的应用，其特征在于，该方法应用于人骨髓间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞的IDO1活性检测。