[发明专利]一种PEMV-1和PEMV-2的RT-PCR同步检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.引物组合，其特征在于，包括第一引物组合和/或第二引物组合；

所述第一引物组合，具有：

(I).上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；和

(II).下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

(III).如(I)、(II)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(I)、(II)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列，所述多个为2个至10个；或

(IV).与(I)、(II)、(III)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；和/或

所述第二引物组合，具有：

(I).上游引物具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；和

(II).下游引物具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；或

(III).如(I)、(II)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(I)、(II)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列，所述多个为2个至10个；或

(IV).与(I)、(II)、(III)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。

2.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物组合，以及可接受的辅料和/或助剂。

3.PEMV-1和PEMV-2 同步检测的方法，其特征在于，包括使用如权利要求1所述的引物组合对待测样品进行扩增、检测；

或使用如权利要求2所述的试剂盒对待测样品进行扩增、检测。

4.根据权利要求3所述的PEMV-1和PEMV-2 同步检测的方法，其特征在于所述检测的体系包括：

5.0 µL 2× 1 step Buffer，2.5 µL RNase Free water，0.4 µL Prime Script®OneStep Enzyme Mix，第一引物组合的上、下游引物各0.25 µL，第二引物组合的上、下游引物各0.2 µL，待测样品总RNA 1.2 µL，共10 µL。

5.根据权利要求3所述的PEMV-1和PEMV-2 同步检测的方法，其特征在于所述检测的扩增程序为：

50℃反转录30 min；94℃ 2 min，然后94℃ 30 s、60℃ 30 s、72℃ 1 min，共进行35个循环，72℃ 10 min，4℃冷却保存。