[发明专利]用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体涉及用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合、试剂盒及方法。本发明针对人类粒细胞抗原HNA 1‑5系统全部11个SNP位点设计了正向引物、反向引物和延伸引物，序列如SEQ ID No:1‑22所示，应用所述引物组合检测人类中性粒细胞抗原基因分型的方法，可实现每批96个或384个样品的批量检测，高通量检测将为相关临床诊断和科研工作带来很大的便利，大大节约实验时间，且检测方法准确、稳定。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体涉及用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合、试剂盒及方法。

背景技术

人类中性粒细胞抗原(Human Neutrophil Antigens，HNA)是在人类中性粒细胞粒细胞表面表达的一组糖蛋白，在同种和自身免疫中起重要作用。个体HNA抗原的差异可以导致输血后产生粒细胞抗体。目前证实HNA抗原、抗体在多种临床疾病中起重要的作用，包括新生儿同种免疫性粒细胞减少症(NIN)、自身免疫性粒细胞减少症、发热性非溶血性输血反应、输血相关性急性肺损伤(TRALI)、骨髓移植后同种免疫性粒细胞减少症、输血相关性同种免疫性粒细胞减少症、药物诱导的粒细胞减少症和粒细胞输注无效等。因此研究HNA抗原具有重要的临床意义。

人类中性粒细胞抗原定义和相关命名法由国际输血协会粒细胞免疫学工作组(ISBT GIWP)HNA命名法规范，并基于相关糖蛋白上的血清学定义表位。采用符号HNA表示人类中性粒细胞抗原，不同抗原系统用数字表示，同一糖蛋白不同的多态性则根据发现先后顺序用小写英文字母表示，如HNA-la、HNA-lb、HNA-1c等。ISBT GIWP已将14个HNA等位基因正式分配给5个HNA抗原系统。

目前HNA特异性鉴定方法主要有血清学方法和基因分型方法。血清学鉴定HNA抗原或抗体方法主要有粒细胞凝集试验、粒细胞免疫荧光试验(GIFT)、单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验(Monoclonal Antibody Immobilization of Granulocyte Antigen,MAIGA)、流式细胞术和ELISA等方法。HNA抗原系统的基因分型方法主要有PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)、实时定量PCR(RT-qPCR)、基于PCR的测序(PCR-SBT)等。

鉴定HNA抗原特异性的血清学方法尽管简单、便宜、与临床关系紧密，但存在耗时多、通量低、依赖抗血清等缺点。现主要应用的HNA抗原系统基因分型方法中：PCR-SSP法需要进行多管扩增，虽然操作简单、试剂便宜，但存在通量低、实验操作工作量大等缺点；RT-qPCR具有多重扩增的优点，但存在检测通量不高、实验检测试剂成本较高等缺点；PCR-SBT法具有能直接检测序列、发现新突变的优点，但存在检测成本高、分析相对复杂、通量不高等缺点。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合、试剂盒及方法。

第一方面，本发明提供用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合，检测的基因位点及对应的正向引物、反向引物和延伸引物的序列如下表所示：

第二方面，本发明提供一种用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的试剂盒，包括所述的引物组合。

第三方面，本发明提供应用所述引物组合检测人类中性粒细胞抗原基因分型的方法，包括以下步骤：

S1、提取待测样本DNA；

S2、以S1的DNA为模板，使用多重PCR技术扩增含有目的SNP的DNA序列，扩增引物为上述的正向引物和反向引物；

S3、扩增的PCR产物SAP处理后，利用上述的延伸引物进行单碱基延伸；

S4、获得的单碱基延伸产物，转移到SpectroCHIP芯片上，进行质谱检测，确定其基因型。