[发明专利]一种含打拐基因座的33个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种含打拐基因座的33个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒及方法，试剂盒采用六组双荧光染料方法标记制备33个STR基因座复合扩增引物组，同时扩增33个STR位点。本发明因采用六组荧光染料标记，具有33个STR位点信息，根据中国人口数据扩展等位基因分型，选择适合中国人群遗传的高多态性位点，个体识别能力较强；包含D8S1132、D6S477、D19S253、D3S3045、D15S659、D10S1435等打拐基因座，同时包含SE33、Penta D、Penta E、FGA、D6S1043等高多态性的基因座；且适用于多种检材，高效提供位点信息，适用性性强；提高了检测的灵敏度、扩增效率；具有良好的种属特异性和适用性。

技术领域

本发明涉及一种含打拐基因座的33个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒及方法，属于分子遗传技术领域。

背景技术

短串联重复序列(简称STR)也称为微卫星或简单序列重复(SSR)，是一类广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列，核心序列为2-6个碱基重复单位。STR基因座数量大，分布广泛，约占整个基因组的3％(International Human Genome SequencingConsortium，2001)，且多态性高，其多态性主要源自核心序列重复次数在个体间的差异，并且这种差异在遗传过程中遵循孟德尔遗传规律。因此，STR扩增检测技术被广泛用于个体识别、亲缘鉴定和群体遗传学研究。

常染色体个体识别DNA荧光检测试剂盒开发主要采用目前应用最为广泛的多重PCR复合扩增和多色荧光标记检测技术，用于生物学检材的DNA基因分型。根据国内外已有的和我们自己在STR基因座方面的研究成果，并依据这些基因座在人群中等位基因频率分布的特异性，我们选择在人群中具有较高的多态性和杂合度的基因座，在这些基因座附近设计引物并分别标记荧光素，通过多重PCR扩增体系，对多态性STR基因座进行特异性扩增，然后与已知长度并标有荧光素的分子量标准品混合，在遗传分析仪或测序仪上电泳并收集电泳信息，继而对STR基因座的PCR产物分别进行长度和基因型分析，获取所需数据，达到个体识别的目的。

随着STR-PCR技术的发展，越来越多的复合扩增体系被研究开发，常染色体STR检验由于能达到同一认定，因此在个体识别、亲缘关系鉴定中发挥了重要作用。在案件侦破中，常染色体STR检验在证据链中有着举足轻重的作用，因此常染色体STR检验被广泛应用于案件侦破中。目前，在我国dna数据库样本检验中，常染色体STR检验仍然是重点，我国的dna数据库总量已经达到8000万，为案件的比对及串并提供了有力支持。目前国内外有多家公司如ab、promega、中德美联、阅微、海尔施都有常染色体STRs试剂盒，但这些商品化试剂盒无法单独满足中国打拐DNA数据库常染色体基因座的要求，需要配合其他补充试剂盒以达到DNA数据信息位点要求。如：AGCU 21+1FS试剂盒，工作量偏大。

同时，现在国内市场上关于常染色体STR的荧光检测试剂盒中对于引物的标记通常采用四组如6-FAM、VIC、NED和PET，五组如6-FAM、VIC、NED、TAZ和SID单荧光染料进行标记。其中VIC、NED、PET等荧光染料的激发波长均大于540nm，因为波长越长能量越低，所以使用VIC、NED、PET等单荧光标记的引物扩增的产物在进行电泳时其所发射出来的荧光相对较弱，不利于遗传分析仪中的激光检测器进行信号收集，很容易造成STR位点信息的丢失。

发明内容

本发明提供一种含打拐基因座的33个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，采用6组荧光染料标记方法，建立了33个STR复合扩增检测体系，可同时扩增33个STR位点，同时提供33个STR位点信息，具有灵敏度高，扩增速度快，信息量大的特点，可高效进行个体信息识别；同时符合录入“打拐DNA数据库”的DNA数据要求。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：