[发明专利]柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记及其应用和检测方法在审
| 申请号： | 202211182448.0 | 申请日： | 2022-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN116200503A | 公开（公告）日： | 2023-06-02 |
| 发明（设计）人： | 豆威;刘天远;高一凡;王进军;袁国瑞 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 重庆双马智翔专利代理事务所(普通合伙) 50241 | 代理人： | 顾晓玲 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 柑橘 甲氰菊酯 抗性 分子 标记 及其 应用 检测 方法 | ||
1.一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记，其特征在于：所述分子标记具有核苷酸序列如SEQ ID NO.9和/或SEQ ID NO.10和/或SEQ ID NO.11所示的柑橘木虱电压门控钠离子通道基因，
如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_L925M突变，
如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_M918T突变，
如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_M918L突变，
野生型柑橘木虱电压门控钠离子通道基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于：野生型柑橘木虱电压门控钠离子通道基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.权利要求1所述的分子标记在柑橘木虱对甲氰菊酯敏感种群和抗性种群分类中的应用。
4.一种扩增权利要求1所述分子标记的特异性引物对，其特征在于：所述引物对为Dc_VGSC3_F/Dc_VGSC3_R，引物序列如下：
Dc_VGSC3_F：5’-GGCCTTGTTGCTTAGAGT-3’，
Dc_VGSC3_R：5’-GACGTCCTCTTTCACTCAAC-3’。
5.一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记的检测方法，其特征在于：先提取待测柑橘木虱的总DNA，以总DNA为模板用权利要求4中的特异性引物对进行PCR扩增，得到扩增产物Dc_VGSC基因片段，分析PCR扩增产物是否含有权利要求1所述的分子标记，即可判断取待测柑橘木虱是对甲氰菊酯的敏感种群还是抗性种群。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：分析PCR扩增产物是否含有权利要求1所述的分子标记的具体方法为:
将PCR扩增产物进行测序，与权利要求1中的柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记进行序列比对，如果PCR扩增产物的序列与SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示的序列相同，说明检测的柑橘木虱属于甲氰菊酯抗性种群。
7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为12.5μL2×PrimeSTARMax Premix、浓度为10uM的正、反向引物各1μL、2μLDNA模板，补充ddH2O至25μL。
8.根据权利要求5至7任一项所述的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s、35次循环；最后72℃延伸10min。
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